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猴泡沫病毒（Simian Foamy Virus,SFV）属于反转录病毒科，泡沫反转录病毒亚科，是一种类似于猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus,SIV）的反转录病毒。SFV虽然不会对灵长类动物致病，但在物种间的传播会引起致病性的改变，猴作为一种重要的模式动物，应用于多种疾病模型，也用于相关生物制品的生产，因此，进一步完善对实验猴群的质量监控迫在眉睫。在实验动物病毒检测等级标准中，猴泡沫病毒是清洁级实验动物应排除的病原体。目前，多用全病毒包被ELISA法及PCR法检测SFV感染状况。现有检测方法的检测范围有限，程序较为复杂。 本课题尝试从两个方面建立 SFV的检测方法，一是从分子生物学方面，建立SFV核酸的PCR检测方法及荧光定量PCR方法；二是从血清学方面，合成重组蛋白代替SFV抗原来检测血清中的SFV抗体，并建立猴泡沫病毒的间接免疫荧光检测法。同时，将所建立的检测方法应用于实验用猴及相关生物制品的检测，以验证其开展实际应用的价值。 根据NCBI上发表的SFV-1的基因组序列，将其与小鼠白血病病毒（MuLV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）等反转录病毒科病毒的基因组进行比对，找出差异序列，设计引物。筛选到四组引物，其中PCR引物一组，RT-nestPCR引物三组。为验证引物的特异性，设立了小鼠白血病病毒（MuLV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、麻疹腮腺炎病毒和正常BHK-21细胞等多个对照。只有SFV有特定大小的目的条带出现，特异性较好。对四组引物进行灵敏度比较，有一组RT-nestPCR引物灵敏度最高，可检测到的最小病毒滴度为106.3TCID50，可检测到的最小核酸浓度为0.26pg/μL。 以定量的10倍系列稀释的质粒pGEM-T Easy-SFVpol为标准品进行荧光定量PCR扩增，建立了检测SFV的荧光定量PCR方法。用建立的检测方法对猴外周血淋巴细胞及脊髓灰质炎疫苗进行检测，并与常规 PCR检测方法作比较。结果显示，所建立的方法灵敏度可达4705拷贝/μL，比常规PCR检测方法灵敏度高100倍，而与小鼠白血病病毒（MuLV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）没有交叉反应，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适合于对猴群及相关生物制品的SFV进行批量检测。 用大肠杆菌BL21(DE3)表达了gag蛋白C末端的193个氨基酸，该区域为免疫优势表位，有较强的诊断潜能。对表达的蛋白进行纯化，并用蛋白印迹法检验其抗原性，与SFV抗体阳性的小鼠血清及猴血清有明显反应，与MuLV抗体阳性的小鼠血清无明显反应，说明所表达抗原特异性良好。用方阵滴定法确定抗原的最适工作条件为：包被抗原浓度5μg/ml，BHK-21细胞正抗稀释度1：20000，血清稀释度1：80，羊抗人二抗稀释度1：30000。评价猴泡沫病毒重组抗原ELISA检测方法的精密度及重复性，并应用于实验用猴的检测。 为检测实验用猴群中 SFV的感染情况，建立了针对猴血清的间接免疫荧光方法（IFA）。用SFV病毒BHK-21细胞培养的方法制备抗原，通过浓度梯度滴定，分别确定了一抗猴血清的最佳工作浓度为1:10，二抗FITC标记的羊抗人IgG抗体的最佳工作浓度为1:100。根据荧光强度可以对猴血清抗体水平进行半定量分析。 所建立的PCR方法可以作为SFV感染的确证方法，荧光定量PCR技术检测SFV国内外尚未见报道，该方法准确性好，检测效率高，可用于猴泡沫病毒的定量检测，为评价实验动物猴泡沫病毒的感染状况提供了依据。在国内首次建立了猴泡沫病毒的重组抗原ELISA检测方法，为SFV检测标准的制定提供了技术条件。结合免疫荧光检测方法，有利于确定猴群中感染SFV的真实水平。