真菌引起的病害常导致经济作物产量下降和品质变劣,危害极大。植物抗菌肽能有效抑制番茄、马铃薯、烟草、小麦、苜蓿等多种作物和牧草的病原真菌,是一类主要的生物农药类型。杜仲具有抗菌、抗病,抗病毒等多种抗病性,这与其含有的抗菌蛋白有关。论文对杜仲抗菌肽——橡胶素编码EuAFP1基因进行克隆和植物遗传转化及抗真菌活研究,以为作物和牧草的真菌病害抗性改良提供依据。主要研究内容和结果如下:1.杜仲EuAFP1基因的克隆。根据植物抗菌肽保守结构域从杜仲基因组（hmmer3.0）中筛选到EuAFP1基因（>GWHPAAAL014598）并设计全长扩增引物,以杜仲幼叶c DNA为模板同源扩增获得EuAFP1序列。EuAFP1基因全长为1002 bp,编码329个氨基酸的亲水性蛋白,与杜仲几丁质酶基因EuCHIT2、矮牵牛Pn-AMP以及马齿苋Ac-AMP等抗病基因聚为一族。构建以GUS::NPTII为报告基因和抗性筛选基因,以35S启动子驱动目的基因的植物表达载体p SH-35S-EuAFP1。2.EuAFP1基因的模式植物转化及抗菌活性。对6～7叶期的K326烟草第5～6轮叶进行注射转化,GUS报告基因高表达时期为转化后4～6 d;通过沾花法将EuAFP1基因遗传转化拟南芥获得4株转基因（TP）植株。通过打孔法和分光光度法,分别对转化4～6 d的受体烟草和T1代TP拟南芥叶片的粗蛋白提取液进行抗菌活性分析,发现两种植物的重组蛋白（rEuAFP1）粗提液对白粉菌、灰霉菌和尖孢镰刀菌三种真菌有明显抑制活性（p<0.05）。3.EuAFP1遗传转化番茄及转基因番茄的抗病性。采用注射法将EuAFP1基因转化番茄叶片,对开始表达GUS蛋白的第3 d转化叶片接种灰霉病菌,发现和野生型亲本（WT）相比较注射期间的TP叶片发病晚、病斑小、扩散慢,较好保持绿色。转EuAFP1基因番茄对灰霉病有一定抗性。4.EuAFP1遗传转化百脉根和转基因百脉根抗病性分析。建立百脉根非组培遗传转化体系,通过该转化体系获得18株TP百脉根。白粉病菌接种实验发现,TP相较于感染同期WT叶片,能较好保持绿色,病斑面积小,扩散慢。尖孢镰刀菌接种实验发现,同期TP百脉根的根部组织褐变程度轻完整性好,病斑转移慢,保持较好的生长特性。转EuAFP1基因百脉根具有良好的白粉病和根腐病抗性。研究表明,杜仲EuAFP1具有白粉菌、灰霉菌和尖孢镰刀菌三种真菌抑制活性,可有效改善植物的灰霉病、白粉病和根腐病抗性,研究结果可为利用EuAFP1基因进行抗病作物和抗病牧草分子育种提供一定参考。