枯草芽孢杆菌SH7抗菌物质的研究及对烟草青枯病的生物防治作用

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本论文通过对枯草芽孢杆菌SH7抗菌物质的纯化及其特性进行研究和对烟草青枯病生防作用的研究,探明枯草芽孢杆菌SH7菌株产抗菌蛋白的最佳发酵条件、抑菌蛋白特性及对烟草青枯病生防作用的效果。抗菌谱测定结果表明,SH7对多种植物病原真菌、细菌具有较强的抑制作用。为该菌及所产活性物质的开发利用提供依据,也可为生物防治植物病害生物防治提供研究基础,主要结果如下:1.经摇瓶振荡培养实验,筛选出了枯草芽孢杆菌SH7产抗菌活性物质的最佳培养条件即:最佳培养基为NA液体培养基,最佳发酵条件为:pH6.0,26℃,装液量100mL,170 r/min振荡培养96h,此时对烟草青枯病菌的抑菌活性最大,即产生的活性物质最多。2.抗菌谱测定表明,SH7菌株产生的抑菌蛋白对多种植物病原真菌、细菌具有较强的抑制作用。该抑菌蛋白质具有较好的热稳定性,在100℃、121℃处理20min,其抑菌活性仍保持为83.1%、68.0%。抑菌蛋白在中性和碱性环境下比较稳定,在pH9.0、pH10.0时其抑菌活性仍保持为86%、88%。蛋白酶K、胃蛋白酶对粗提液几乎没有影响,抗菌蛋白具有淀粉酶活性。SH7菌株分泌的抗菌蛋白能减少烟草青枯病菌分泌胞外多糖的量。3.通过硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和SephadexG-75凝胶层析对硫酸铵饱和度为30%沉淀下的蛋白质进行纯化,纯化出一种抑菌蛋白,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对分子量测定,该抑菌蛋白分子量约为33.6KDa。4.在温室盆栽试验结果表明,抗菌蛋白粗提液对烟草青枯病的防治效果为70.8%;在田间示范试验中,生防菌剂SH7和生防菌剂SH7颗粒剂与72%甲霜灵。锰锌可湿性粉剂混施对混合发生的烟草青枯病的田间防效分别为30.36%和46.86%,好于单独施用72%甲霜灵。锰锌可湿性粉剂的防效。
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