表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)属于ErbB家族中的一员,由于它与多种肿瘤的发生发展密切相关因此已经成为重要的肿瘤治疗靶点。目前市场上已经有许多靶向EGFR的单抗药物被研制和开发,如西妥昔单抗(Cetuximab),帕妥株单抗(Pertuzumab),曲妥珠单抗(Trastuzumab)等。这些单抗通过与EGFR天然配体的竞争性结合,阻断原来EGFR下游信号通路的激活,从而抑制肿瘤的增殖、侵袭和转移。由于单抗药物的耐药性,目前临床上会选择将两种单抗联合在一起进行治疗,在相关研究中显示两种靶向不同的表位的抗体联合使用时,也就是非竞争性抗体联用时,相比于单一使用一种抗体时肿瘤的抑制率会得到明显提升。在研究抗体联合使用的机制中,Yarden等发现相比抗体单独使用或两种竞争性抗体联合使用,两种非竞争性抗体联用后,细胞表面的EGFR发生更多的内吞,抑制了EGFR及内吞体的相关胞内循环,促进了胞内的EGFR降解,也使内吞体在胞内发生大量降解,使得细胞表面EGFR数目有效下调,细胞内生长信号得到有效抑制。可见该过程中EGFR发生大量的内吞是该机制的关键,但其原因却尚不明确。关于EGFR的网格蛋白内吞模型的相关研究已较成熟,但却无法解释两种非竞争表位的抗体作用下EGFR的内吞行为。有研究者根据非竞争性抗体的特点提出了一个Lattice Model假说,由于表位的非重叠性,两种抗体可能在细胞膜表面由两个可变区分别与两个EGFR结合,该假说推测EGFR的大量内吞行为与细胞表面形成的大分子量的抗体-受体复合物有关,从而引起EGFR在细胞膜上的大量聚集,引发EGFR的大量内吞。但该机制尚缺少更多的实验证据支持,尤其是细胞膜上Lattice的形态观察。本论文在实验中主要利用免疫荧光的方法,利用3D-SIM超高分辨率显微镜,为细胞膜上Lattice的存在提供证据支持,进一步探讨Lattice假说的确证性,并对两种非竞争性抗体联用时EGFR的内吞方式进行确认。本论文中使用了多种EGFR竞争性与非竞争性的抗体进行联合使用,对细胞骨架的形态变化进行了染色观察分析,确定了非竞争性抗体联用时EGFR的内吞方式为巨胞饮,并在细胞膜上发现了Lattice真实的存在状态,为Lattice的存在提供证据支持。此外,本研究发现磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)对非竞争性抗体联用引发的高强度巨胞饮也十分重要。本研究为如何选择使用抗体及设计抗体,推进抗体的临床联用,以主动选择EGFR内吞的方式,从而促进EGFR大量内吞提供了可借鉴的细胞生物学数据支持,同时为ADC药物的抗体设计提供了优化方向和机制参考。