目的:Lactosyl ceramide是糖鞘脂(G1ycosphingolipids)的一类，Lactosyl ceramide属于神经鞘脂(Sphingolipids)，是一类具有一个极性的头部，两个非极性的尾部的跨膜糖脂，主要存在于神经系统，在非神经系统主要存在于胃、小肠、脑、肾和肺。磺酰化(Sulfated)的lactosyl ceramide(SM3)在肿瘤转移方面的功能于上世纪90年代由Hiroshi等进行初步的研究，但其在肿瘤细胞信号转导方面的很多细节问题研究几乎是空白。本实验室已完成的研究提示磺酰化的功能之一可能是通过某种信号途径提高如integrin alpha vsubunit。本课题就是要探讨integrin alpha v subunit是否因为磺酰化而升高，其次探讨其升高的可能机制，以便进一步完善磺酰化的功能研究。 方法:为观察磺酰化对肝癌细胞integrin alpha v subunit表达的影响，以不同浓度的sulfated lactosyl ceramide处理细胞后，观察12小时、24小时和48小时内不同时间点integrin alpha v subunit的表达，加入不同浓度外源sulfated lactosyl ceramide衡量其对integrin alpha v subunit的影响，通过RT-PCR和Western blot两种实验方法观察mRNA水平和蛋白水平的差异大小；为进一步验证sulfated lactosyl ceramide的特异的磺酰化而非其它因素导致 integrin alpha v subunit表达差异，我们用了两个外源性结构电荷相似化合物为对照以排除可能产生的偏误，其次为更加明确磺酰化的作用，我们构建了CST正义质粒并用构建CST RNAi质粒，进行细胞稳定转染，也以RT-PCR和Western blot的方法测定可能的integrin alpha v subunit表达差异。在此前提下，我们又以同样的方法测定了影响integrin alpha v subunit 最有可能的转录因子Sp1。 结果:第一步的RT-PCR和Western blot检测结果表明sulfated lactosyl ceramide对于肝癌细胞integrin alpha v subunit表达有明显的提高，并以时间与剂量依赖的方式调节integrin alpha v subunit的表达，其中以24小时2mmol为最长有效时间和最大浓度；sulfated lactosylceramide的integrin alpha v subunit的表达与其四个结构电荷相似化合物参照在mRNA水平和蛋白水平上有差异，sulfated lactosyl ceramide的立体构象或电荷数与integrin alpha v subunit表达没有明显的关系，内源性的sulfated lactosyl ceramide也可以提高integrin alpha v subunit表达 (RT-PCR与Western blot)；如上所述，转录因子Sp1与 integrin alpha v subunit同向变化；除此之外，所有的瞬时转染都支持同样的结果。 结论:sulfated lactosyl ceramide对于肝癌细胞integrin alpha vsubunit表达有明显的提高；转录因子Sp1与integrin alpha v subunit同向变化，sulfated lactosyl ceramide的integrin alpha v subunit差异表达的根本原因是外加的磺酰基团同时Sp1参与其中。