茴香霉素对Jurkat T细胞的抑制作用及其机制

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目的:探讨茴香霉素对人白血病Jurkat T细胞的抑制作用及其机理。方法:应用MTT法分析茴香霉素对多种人类肿瘤细胞的抑制作用,筛选其抗肿瘤谱;选择抑制效果较好的Jurkat T细胞作为研究对象,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测茴香霉素对豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)和离子霉素(Ion)诱导Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25的表达;利用倒置显微镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察茴香霉素对Jurkat T细胞的集落形成和增殖影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测茴香霉素对Jurkat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测茴香霉素对Jurkat T细胞凋亡的影响;应用ELISA酶联免疫吸附方法检测细胞培养液上清中白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素17(IL-17)、转移性生长因子β(TGF-β)、干扰素γ(IFN-γ)的表达量;采用Western Blot蛋白质印迹法分析细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的表达情况。结果:随茴香霉素浓度升高,各细胞系生长抑制率逐渐升高,在160 ng/ml浓度时抑制率最明显为人粒细胞白血病HL-60细胞,达到81%,抑制率最低为人宫颈癌HeLa细胞,达到31.29%;在PMA和Ion共同刺激下随茴香霉素剂量上升CD69和CD25的表达量逐渐下降;随着茴香霉素剂量增高,Jurkat T细胞的集落形成减小;使细胞周期停滞于G0/G1期;当茴香霉素剂量为40.0~160.0 ng/ml时能明显促进Jutkat T细胞凋亡;随着茴香霉素浓度升高,IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、TGF-β的表达量逐渐降低;在40 ng/ml茴香霉素刺激下,0—6 h内ERK1/2蛋白的表达量并无明显变化,P-ERK的表达量有微弱上调。结论:茴香霉素对人的多种组织来源的肿瘤细胞具有显著抑制作用,能明显抑制Jurkat T细胞的活化和增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期,抑制多种细胞因子的生成,其对Jurkat T细胞生长的抑制作用可能与茴香霉素抑制TGF-β的表达和促进Jurkat T细胞凋亡有关.
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