【摘 要】
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研究目的釉丛蛋白1(Tuftelin1,Tuft1)是一种酸性蛋白,可能参与间充质干细胞及神经细胞的分化,其对乳腺癌及胰腺癌的生长具有促进作用。然而在甲状腺癌中的作用尚未见报。本实验将利用体内外环境探讨Tuft1在甲状腺癌发生发展中的作用机制。研究方法1、分析Tuft1在人甲状腺癌组织标本中的表达水平及与患者预后关系。(1)Western blot及Real-time PCR检测Tuft1在人甲状
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目,81670735
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研究目的釉丛蛋白1(Tuftelin1,Tuft1)是一种酸性蛋白,可能参与间充质干细胞及神经细胞的分化,其对乳腺癌及胰腺癌的生长具有促进作用。然而在甲状腺癌中的作用尚未见报。本实验将利用体内外环境探讨Tuft1在甲状腺癌发生发展中的作用机制。研究方法1、分析Tuft1在人甲状腺癌组织标本中的表达水平及与患者预后关系。(1)Western blot及Real-time PCR检测Tuft1在人甲状腺癌组织的表达水平,癌旁组织作为对照。(2)比较组织芯片中Tuft1的表达差异,分析其及与患者生存预后的关系。2、Tuft1在人甲状腺癌细胞株中功能性促癌作用的实验研究。(1)培养人甲状腺癌及甲状腺细胞株,检测Tuft1 m RNA表达水平。(2)Tuft1-si RNA设计、慢病毒感染癌细胞,干扰TPC-1、SW579细胞Tuft1基因的表达。(3)Transwell检测干扰Tuft1基因表达对癌细胞侵袭能力的影响。(4)CCK8检测干扰Tuft1基因表达对癌细胞增殖活力的影响。(5)Annexin V检测干扰Tuft1基因表达对癌细胞凋亡的影响。(6)体内观察Tuft1基因敲低对肿瘤生长的影响。(7)经IHC及TUNEL染色检测干扰Tuft1基因表达对肿瘤组织增殖、凋亡的影响。3、基于GSEA分析寻找并验证Tuft1调控肿瘤生长的分子信号途径。(1)基于甲状腺癌疾病组织表达谱芯片,经GESA分析寻找Tuft1基因差异表达富集的信号通路。(2)Western blot验证Tuft1调控的具体信号途径。研究结果1、Tuft1在人甲状腺癌组织中的表达显著高于癌旁对照组织标本。Kaplan-Meier生存曲线分析证实Tuft1的表达水平及与患者预后呈负相关。2、基于si RNA技术下调Tuft1的表达,抑制癌细胞(TPC-1、SW579)的侵袭、增殖能力,并诱导癌细胞凋亡,同时降低癌细胞的体内成瘤能力。3、GESA分析筛选出Tuft1基因高低表达富集的信号通路。经Western blot证实,Tuft1的促瘤能力与激活Akt-m TOR及Akt-GSK3β信号通路密切相关。研究结论:1、Tuft1在人甲状腺癌组织中的高表达水平影响患者生存率。2、下调Tuft1基因表达抑制甲状腺癌细胞的侵袭、增殖能力,并诱导其凋亡。3、Tuft1的促瘤能力与激活Akt-m TOR及Akt-GSK3β信号通路密切相关。
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