啤酒花中黄腐酚的提取纯化方法及其降脂、抗氧化作用的研究

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黄腐酚(Xanthohumol)是存在于啤酒花中的一种结构简单的含异戊二烯基的黄酮类物质,目前发现黄腐酚仅存在于啤酒花中,是啤酒花中主要的黄酮类物质之一。啤酒花用于啤酒酿造中的主要有效成分是酒花树脂及酒花油。超临界CO2可以实现对这些成分的有效萃取,制备的啤酒花浸膏因质量稳定,易于储存和利用率高等特点在啤酒酿造中的使用量正在逐年增加。但是唯一存在于酒花中的黄腐酚却不能被超临界CO2萃取出来,残留在超临界CO2萃余物——废酒花中,而这些废酒花基本上作为废弃物,未得到有效利用。因此,本文主要研究了从超临界CO2萃余物即废酒花中提取及分离纯化黄腐酚,并通过小鼠动物实验研究了黄腐酚的降血脂及抗氧化的功能,为降血脂和预防动脉粥样硬化提供新药来源,可为废酒花的再利用提供理论基础。主要研究内容及结果如下(1)实验对超声波和恒温气浴震荡两种方式提取黄腐酚进行了对比,通过实验表明,超声波提取方式优于恒温气浴震荡。(2)实验采用甲醇、乙醇和丙酮作为提取溶剂提取废酒花中的黄腐酚,提取液经HPLC测定结果表明,丙酮作为提取溶剂得到的黄腐酚含量最高,甲醇和乙醇提取得到的黄腐酚含量相当,但考虑到溶剂残留的毒性问题,实验选择乙醇作为提取溶剂。(3)实验对几种不同分离纯化黄腐酚的方法进行了验证,包括大孔树脂吸附法、溶剂多步萃取法、硅藻土吸附法及碳酸钠盐析法,得到的黄腐酚纯化物最高的为溶剂多步萃取法(51.2%),但得率低(19.34%),得率最高的为大孔树脂吸附法(93.56%),但纯度较低(11.6%)。以后的实验中考虑先采用大孔树脂吸附法初步分离,再用溶剂多步萃取法进一步纯化黄腐酚。(4)通过小鼠体内实验得出:XN低(2mg/10g bw·d)、中(6mg/10g bw·d)、高(12mg/10g bw·d)三个剂量组均可显著降低小鼠血清中的TG,并且可显著升高小鼠血清中的HDL-C,表明黄腐酚有降血脂的作用;高脂组小鼠饲用黄腐酚后,血清MDA含量降低,肝脏SOD活力升高,血清和肝脏CAT活力升高,表明黄腐酚有抗氧化的作用;高剂量黄腐酚(12mg/10g bw·d)有导致胆固醇代谢紊乱的作用;正常小鼠饲用中剂量(6mg/10g bw·d)黄腐酚对体内脂代谢没有影响;正常小鼠饲用中剂量(6mg/10g bw·d)黄腐酚后,血清GSH-Px、CAT活力显著降低,肝脏MDA含量显著升高,SOD、GSH-Px活力显著降低,表明中剂量黄腐酚对小鼠体内有氧化损伤作用。(5)通过分光光度法和电泳法两种方法,验证了不同浓度的黄腐酚样品对小牛胸腺DNA损伤的影响,分光光度法结果表明,当黄腐酚浓度在一定范围内时(XN浓度小于0.5mg/m1),黄腐酚对DNA损伤有抑制作用;电泳法实验结果表明黄腐酚浓度在0.1-1.5mg/ml范围内,对DNA损伤有抑制作用且随着浓度的增加对DNA损伤的抑制作用逐渐加强。
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