变形杆菌属脂肪酶LipK107的纯化、结晶及初步晶体学分析

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:himiro
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脂肪酶是一类重要的水解酶,普遍存在于动植物和微生物体内,其中微生物来源的脂肪酶占据较大部分。脂肪酶能够催化脂类物质中酯键的水解。它们被广泛应用于脂类加工、食品加工、精细化学品及药物合成、清洁剂配方、造纸、化妆品生产等行业。  本研究以实验室保存的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)-pET28b-lipK107为出发菌株,通过诱导表达得到脂肪酶LipK107粗酶液,经过亲和层析和凝胶层析两步法纯化,得到了高纯度的脂肪酶LipK107纯酶。  在获得的纯酶基础上,进行了圆二色谱分析,以计算脂肪酶LipK107的二级结构组成。使用悬滴气相扩散法进行了纯酶的结晶实验,经过晶体生长条件的初步筛选及优化,在0.1M柠檬酸钠pH6.2,10%v/v异丙醇,15%w/v聚乙二醇4000条件下得到高质量晶体,使用同步辐射光源收集了一套分辨率为2.0?的X-射线衍射数据。数据表明,脂肪酶晶体属于三方晶系P32,晶胞参数为a=b=64.962?,c=62.226?。每不对称单位中含有的的蛋白质分子数为1,Matthews常数为2.45?3Da-1,溶剂含量为49.7%。
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