作为我国北方地区主要的人工养殖海水鱼类之一，半滑舌鳎以肉质鲜美闻名，的产量及市场需求量逐年增加。然而在自然条件下，雄性个体的发育远滞后于雌性，影响受精卵质量和数量。因而，从基因水平研究半滑舌鳎精子发生过程，对提高雄鱼精子质量，大规模培育优质、高产苗种，推动半滑舌鳎人工养殖业发展具有重大意义。根据全基因组测序获得的部分序列信息，本研究对半滑舌鳎piwil2基因进行了cDNA全长克隆，表达分析，启动子甲基化水平检测及染色体定位。Piwil2基因全长3314bp，包括3’UTR92bp,5’UTR60bp,一个3162bp的开放阅读框（ORF），其编码的PIWIL2蛋白相对分子质量为117kDa，理论等电点为8.81，由1053个氨基酸残基组成。经预测分析，PIWIL2蛋白含有典型的piwi结构域和PAZ结构域，无信号肽位点，是Argonaute蛋白家族，Piwi亚家族的一员。RT-qPCR结果显示，在性成熟雌性、雄性半滑舌鳎的11种组织中，piwil2基因只在其性腺中特异表达，且精巢中的表达量明显高于卵巢。而在半滑舌鳎雌、雄仔鱼的性腺中，出膜后20天至80天时均检测不到piwil2基因表达。自出膜后95天起，piwil2基因才开始大量表达，且精巢的表达量显著高于卵巢。经染色体定位，确定了piwil2基因是位于半滑舌鳎的Z染色体上。由此可见，piwil2基因不是半滑舌鳎的性别分化的相关基因，但是在半滑舌鳎雄鱼的精子发生过程起重要作用。以性腺DNA为模板，利用亚硫酸氢钠测序法（bisulfite-sequencing PCR, BSP），本研究分别检测了雄鱼、雌鱼、伪雄鱼性腺中piwil2基因启动子区域的甲基化水平。结果显示，雄鱼、伪雄鱼精巢的piwil2基因启动子区域甲基化水平均显著低于雌鱼卵巢。由此可知，piwil2基因在雌雄鱼性腺中的表达差异是由其启动子区域甲基化水平的差异导致的。以半滑舌鳎性腺cDNA为模板，通过序列验证及RACE末端扩增，本文成功拼接获得一个生殖干细胞分裂调控基因pik3r1。该基因全长2443bp，其中3’UTR长116bp，5’UTR长173bp，一个完整的开放阅读框2154bp，编码717个氨基酸残基，编码产物相对分子质量81.7kDa，理论等电点为5.88。不同发育时期的生理组织学切片及RT-PCR结果表明，该批半滑舌鳎雄鱼从95d开始进入精子发生时期，pik3r1基因的表达量持续增加。对成鱼不同组织的荧光实时定量结果显示，pik3r1基因在成鱼性腺中的表达量显著高于其他组织，且精巢的表达量明显高于卵巢，说明pik3r1可能参与了半滑舌鳎精巢成熟及精子发生过程。