HBV宫内感染的发生主要与病毒本身、母体和胎儿的免疫状况及胎盘因素等有关。HBV宫内传播的途径可能有两种：一种是血源性途径，另一种是“细胞转移”途径。但是确切的传播机制目前仍不十分清楚，因而有必要从HBV基因结构入手，从不同角度对宫内感染机制进行深入探讨。本研究运用分子生物学的技术方法，结合临床与流行病学的资料，分析HBV基因的变异，初步筛选了可能与宫内感染有关的特异性基因结构，探讨了HBV基因异质性与宫内感染的可能关系，从而为阻断HBV的宫内传播提供理论依据。 方法 ①1997年8月～1998年5月和2001年8月～2002年1月收集陕西省妇幼保健院妇产科足月分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血，共70对。根据新生儿发生宫内感染与否，将其母亲分为宫内感染组和未感染组。同时还收集到1例孕中期引产的HBsAg阳性孕妇血清和引产胎儿肝脏。②提取血清中HBV DNA，扩增宫内感染组4对母婴和未感染组5例母亲HBV 2.5kb或1.2kb基因片断，PCR产物纯化后克隆入pUC19载体，经PCR、酶切和测序鉴定，共得到63株HBV序列。③采用Megalign软件对全部HBV株前C／C基因和前S／S基因序列进行分析，确定基因亚型和血清亚型，构建种系进化树，比较各基因区的差异性。④比较发生宫内感染的4对母婴HBV序列间基因位点的不 第。军厘夭嗲币士恰大同，基因差异性的高低以及种系进化关系。⑤分别比较宫内感染组新生儿和未感染组母亲、宫内感染组母亲和未感染组母亲之间核昔酸序列、氨基酸序列的差异。⑤扩增引产孕妇 HBV 2．skb基因片断和引产胎肝中 HBV S区 500hP基因片断，克隆后各选取一株母胎序列进行相似性分析，并同其它序列的变异位点进行比较。 结果①从新生）L血清中扩增 2．skb门．Zkb HBV DNA，2例（NA和 ND）新生）L的血清中得到 2．skb DNA片断，还有 2例（NB和 NC）得到 l．Zkb DNA片断，同时从该4例新生）乙的HBSAg阳性母亲（MA～MD）血清中扩增到2．skbDNA片断。此外，从同期新生儿未感染的5例HBSAg阳性母亲（E～I）血清中也扩增到 HBV 2．skb片断。②用 63株HBV序列的前 S侣区和 Ge咀毗中 A～F基因亚型标准序列的前S／S区构建HBV的种系进化树，全部HBV株与C基因亚型标准序列（M12906）的进化距离最接近。而且与M12906的相似率最高，平均为 97．41％，表明这 63株 HBV序列都属于 C基因亚型。在 C基因亚型内，又以核昔酸差异率＜2．0％为界，划分为 1群和 11群，分别有 36和 27株 HBV序列。63株HBV序列在HBsAg的122位氨基酸为K，160为凡均为adr亚型。③HBV 5个基因区的核苦酸相似率存在差别（F＝＝146．587，P＜0．0005人 以前 C区为最高，前 SI区和前 SZ区最低。同样，5个基因区的氨基酸相似率也不完全相同（F＝4刀2，P＝0刀04人而且核昔酸序列异质性的高低与相应氨基酸序列是基本一致的。④发生宫内感染的4对母婴HBV前S沼区序列中，每一例新生儿HBV克隆株间的平均差异率备为0．29％、0石3％、0．35％和0．50％，每一例母亲HBV株的平均差异率分别为 0．55％、0．69％、0．65％和 0．33％，新生）L HBV DNA的差异性低于母体（t＝2．447，Prto刀5人每一对毋婴序列间的平均相似率为 99．47％、99．39％、99．37％和 99．46％，母婴序歹具有高度一致性。分别以每一对母婴核苦酸序列的前S／S区构建种系进化树，可以看出每一对母婴序列间的进化距离都比较小，分别为0．4、0．8、1．2和0．3。发生宫内传播的母婴序列中，母体内的优势株和新生儿体内的优势株是不完全一样的。其中MA 2 第。军医大舍硕士俺式的优势株在NA中没有检到，MC的弱势株成为NC中的优势株，MB和MD的优势株、弱势株在新生儿体内都可以出现。⑤通过对宫内感染组新生儿、宫内感染组母亲和未发生感染组HBSAg阳性母亲序列的比较，初步筛选了可能与HBV感染有关的9个位点。从中可以看出：这9个位点的出现率在三组之间存在明显差别（Rsher精确检验，P＜0．05）。在1群中，成3021、血293、＂t483和＂t797点突变的出现率在宫内感染的新生儿序列中较低，而在未感染组母亲序列中较高（P＜0．0125）；11群中，＂t2909、＂t399、＂t811和 ntsl7点突变在新生儿序列中没有，而在未感染组母亲序列中较高（P＜0刀125人 宫内感染组母亲序列中这些点突变的出现率介于二者之间，与新生儿、未感染组母亲序列比较，其差别无统计学意义。③9个位点分布于不同的基因区：前C区有1个，前引区有 2个，其余均分布于 S区，但都不位于“ a”决定簇表位内。其中 nil 827、52909、9293、m399和 fit483突变，分别引起前 C区 PSH、前引区 LZIP、S区 A47T、T82I和 Pll OL的氨基酸替代，其余 4个突变均为沉默突变，不发生氨基酸替代。而且在两群序列中，上述突变的出现具有同一性。其它位点的突变，则具有个体化趋势。结论①母体内的优势株和弱势株都可以通过宫内传播感染新生儿，可能是?