桑寄生抗白血病有效部位的体外筛选及其诱导白血病细胞凋亡的实验研究

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目的观察桑寄生不同提取部位在体外实验对K562、HL-60白血病细胞增殖、细胞形态的影响,初步筛选出桑寄生抗白血病的有效部位;从细胞凋亡、线粒体膜电位方面探讨桑寄生不同提取部位诱导白血病细胞株的凋亡及其作用机制;应用血清药理学的方法,观察桑寄生含药血清对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响;为进一步研究桑寄生及其成份抗白血病的药理机制及临床应用提供初步的实验室依据。方法采用MTT法检测不同提取部位的桑寄生浸膏对K562、HL-60细胞作用24h、48h、72h后的增殖抑制作用,得出抑制率,并计算其IC50值,同时用倒置显微镜观察细胞形态,初步筛选出桑寄生抗白血病的有效部位;采用桑寄生各有效部位:水提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、氯仿部位、乙醚部位为实验组(根据MTT结果设立高、中、低浓度),阿糖胞苷为阳性对照,1%DMSO的无血清培养液为空白对照,分别作用于K562、HL-60细胞48h,然后上流式细胞仪检测分析细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化(细胞凋亡采用Annexin V/PI双染色法检测,粒体体膜电位采用Rhodaminel23染色法检测);结合血清药理学方法,应用MTT法及流式细胞术检测桑寄生含药血清对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响。最后将检测数据输入SPSS17.0建立数据库进行统计学分析。结果通过MTT法体外抗肿瘤实验,结果显示桑寄生具有一定的抗白血病的活性,而且桑寄生体外对K562细胞的抑制作用比对HL-60细胞的抑制作用明显,即K562细胞对桑寄生较敏感。桑寄生在抗白血病细胞的增殖方面,作用时间越长,浓度越高,对细胞的抑制作用就越强,呈现出较明显的时间-剂量依赖性关系;同时对细胞的生长状态也有明显的影响,细胞密度的变化和细胞形态呈凋亡细胞的变化。MTT实验结果显示了桑寄生不同部位的作用差异,其中乙酸乙酯、氯仿及正丁醇部位显示出较强的活性;水提物、乙醚部位作用较小;而石油醚部位对细胞的影响极小。流式细胞仪检测结果显示,桑寄生有效部位作用于K562、HL-60细胞,可诱使细胞早期凋亡及细胞内线粒体膜电位的降低,实验组与空白组比较P<0.05,差异显著。含药血清实验结果显示桑寄生含药血清可抑制白血病K562细胞的增殖并诱导其早期凋亡,并呈明显剂量依赖性关系,与空白兔血清组比较P<0.05,差异显著。结论研究提示桑寄生通过抑制白血病细胞增殖、诱导凋亡,而具有抗白血病的活性,其凋亡机制中可能包括有线粒体膜电位降低,使胞内环境发生改变,而致白血病细胞死亡。
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