论文部分内容阅读
肠道腺病毒主要诱发婴幼儿急性痢疾,是如今诱发导致婴幼儿病毒性腹泻的仅次于轮状病毒的病原体。如腺病毒40和41型腺病毒,该病毒被确认为主要因素依然引起小儿腹泻。因此针对该病毒进行快速、灵敏的检测方法是预防该疾病的和控制该病的关键所在,本研究制备了抗腺病毒五邻体单克隆抗体,并对其生物特性进行了研究分析和鉴定,创立了双抗夹心ELISA方法,为该病毒的检测及防控供给了有用的检测措施。具体研究情况如下:抗腺病毒五邻体单克隆抗体的制备及鉴定:采用基因工程表达抗原所表达的腺病毒五邻体作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,三后免疫小鼠脾淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合,并以腺病毒五邻体蛋白为筛选抗原对融合后的杂交瘤细胞进行间接ELISA筛选。获得了5株稳定分泌抗腺病毒五邻体单抗的细胞株,标记为3C4、4C4、4D7、4F2和4H3。4D7免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余4株为IgG1。对5株细胞连续3个月体外传代实验和小鼠腹水连续传代实验,5株细胞都能持续稳定分泌单克隆抗体,上清及小鼠腹腔腹水效价在细胞培养中的间接ELISA,细胞培养上清中稳定在2000左右,小鼠腹腔腹水效价稳定维持在200000以上,且与引发痢疾的鼠伤寒沙门氏菌以及轮状病毒无交叉反应。具有稳定性好、特异性强的特点,效价也高。腺病毒五邻体双抗夹心ELISA检测方法的建立:取纯化后的单克隆抗体4F2采用辣根过氧化物酶(HRP)将抗体标记。以单抗4D7为捕获抗体、4F2-HRP为检测酶标抗体,建立双抗夹心ELISA。该检测方法对腺病毒具有特异性,对可引起婴幼儿腹泻的轮状病毒和鼠伤寒沙门氏菌无交叉反应。本研究建立的双抗夹心ELISA检测法对腺病毒亦有较高的灵敏度,有望在临床实验阶段检测腺病毒抗原。