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目的：
通过动物实验观察解毒通络调肝方基于自噬调控保护2型糖尿病SD大鼠胰岛细胞功能的作用机制。
方法：
8周龄 SD雄性大鼠，高脂饲料喂养4周后联合链脲佐菌素（streptozocin， STZ）40mg.Kg-1单次腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠动物模型，中药组予解毒通络调肝方低剂量（1.5 g.kg-1.d-1）、中剂量（4.5 g.kg-1.d-1）及高剂量（13.5 g.kg-1.d-1），西药组予盐酸二甲双胍（0.15 g.kg-1.d-1）。观察 SD大鼠的一般状态、体质量、饮水量，药物干预第4周末，予各组 SD大鼠进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,计算曲线下面积（AUC）。各组 SD大鼠连续灌胃4周后麻醉处死取材，检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血清蛋白（GSP）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪（FFA），Elisa法检测空腹血清胰岛素（FINS）并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。取 SD大鼠胰腺组织，HE染色及 Masson染色观察 SD大鼠胰腺组织病理形态改变，免疫组织化学法检测 Beclin-1、LC3蛋白的表达，Western Blot法检测 Beclin-1、LC3、P62、Bax、Bcl-2蛋白的表达，RT-PCR法检测 Beclin-1、LC3、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达，TUNEL法检测 SD大鼠胰腺组织胰岛细胞凋亡情况。
结果：
1、解毒通络调肝方对 SD大鼠一般状态、体质量、饮水量及糖、脂代谢的影响
对照组 SD大鼠一般状态良好，体重上升平稳，饮水正常，模型组 SD大鼠一般状态差，体重下降明显，饮水量增加，解毒通络调肝方盐酸二甲双胍组 SD大鼠较模型组一般状态改善，体重下降趋势减轻，多饮改善（P＜0.05，P＜0.01）。FBG及 GSP方面，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠均较模型组改善明显，有较好的降糖效果（P＜0.05，P＜0.01）。FINS方面，与对照组比较，模型组 SD大鼠 FINS水平显著上升（P＜0.05），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠 FINS水平显著下降（P＜0.05，P＜0.01）。HOMA-IR方面，与对照组比较，模型组 SD大鼠 HOMA-IR显著上升（P＜0.01），与模型组相比，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组大鼠 HOMA-IR水平显著下降（P＜0.01）。各组大鼠的 OGTT-AUC结果显示，模型组显著上升（P＜0.01），解毒通络调肝方低、中及盐酸二甲双胍组显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。脂代谢方面，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍可降低2型糖尿病 SD大鼠 TG、CHO、LDL-C、FFA水平（P＜0.05，P＜0.01）,提高 HDL-C水平（P＜0.01）。
2、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织病理形态的影响
SD大鼠胰腺组织 HE染色：对照组 SD大鼠胰腺组织结构完整，边界清晰，排列紧密，胞浆丰富；模型组 SD大鼠结构紊乱，边界不清，排列不规则，胞浆少，胰岛内细胞质染色变浅或呈空泡化现象；解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠胰腺组织病理形态结构较模型组均有改善。
SD大鼠胰腺组织 Masson染色：与对照组比较，模型组 SD大鼠胰腺组织纤维化明显,可见大量胶原纤维沉积，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组较模型组明显改善（P＜0.05，P＜0.01）。
3、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织细胞自噬的影响
运用免疫组织化学法检测，模型组 Beclin-1及 LC3蛋白表达水平较对照组下降（P＜0.01），解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 Beclin-1及 LC3蛋白表达均较模型组显著上升（P＜0.01）；运用Western Blot法检测，与对照组比较，模型组的Beclin-1及 LC3 II/I蛋白表达下降（P＜0.01），P62蛋白表达升高（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍可升高 Beclin-1及 LC3II/I蛋白表达（P＜0.01），降低 P62蛋白表达（P＜0.05，P＜0.01）；运用 RT-PCR法检测，与对照组比较，模型组 Beclin-1及 LC3 mRNA表达下降（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组Beclin-1、LC3 mRNA表达显著上升（P＜0.01）。
4、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响
运用Western Blot检测，与对照组比较，模型组SD大鼠Bax蛋白表达升高（P＜0.01），Bcl-2蛋白表达水平下降（P＜0.01），Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组可降低 SD大鼠 Bax蛋白表达（P＜0.01）、升高 Bcl-2蛋白表达水平（P＜0.01），降低 Bax/Bcl-2比值（P＜0.01）；运用RT-PCR法检测，模型组较对照组Bax、Caspase-3 mRNA表达升高（P＜0.01） Bcl-2 mRNA表达水平下降（P＜0.05），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组可降低Bax、Caspase-3 mRNA表达（P＜0.01）、升高Bcl-2mRNA表达（P＜0.01），降低 Bax/Bcl-2比值（P＜0.01）；运用 TUNEL法检测胰腺组织胰岛细胞凋亡率，模型组凋亡率较对照组显著上升（P＜0.01），与模型组比较解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组均能降低2型糖尿病 SD大鼠胰腺组织胰岛细胞凋亡率（P＜0.01）。
结论：
1、解毒通络调肝方可有效缓解2型糖尿病 SD大鼠一般状态及体重下降趋势，改善多饮情况，以及具有较好的改善糖、脂代谢的作用，并且可缓解2型糖尿病 SD大鼠胰腺组织病理结构的损害。
2、解毒通络调肝方可改善2型糖尿病 SD大鼠胰岛β细胞凋亡情况，其保护胰岛β细胞的作用可能是通过增强自噬实现的。
通过动物实验观察解毒通络调肝方基于自噬调控保护2型糖尿病SD大鼠胰岛细胞功能的作用机制。
方法：
8周龄 SD雄性大鼠，高脂饲料喂养4周后联合链脲佐菌素（streptozocin， STZ）40mg.Kg-1单次腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠动物模型，中药组予解毒通络调肝方低剂量（1.5 g.kg-1.d-1）、中剂量（4.5 g.kg-1.d-1）及高剂量（13.5 g.kg-1.d-1），西药组予盐酸二甲双胍（0.15 g.kg-1.d-1）。观察 SD大鼠的一般状态、体质量、饮水量，药物干预第4周末，予各组 SD大鼠进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,计算曲线下面积（AUC）。各组 SD大鼠连续灌胃4周后麻醉处死取材，检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血清蛋白（GSP）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪（FFA），Elisa法检测空腹血清胰岛素（FINS）并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。取 SD大鼠胰腺组织，HE染色及 Masson染色观察 SD大鼠胰腺组织病理形态改变，免疫组织化学法检测 Beclin-1、LC3蛋白的表达，Western Blot法检测 Beclin-1、LC3、P62、Bax、Bcl-2蛋白的表达，RT-PCR法检测 Beclin-1、LC3、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达，TUNEL法检测 SD大鼠胰腺组织胰岛细胞凋亡情况。
结果：
1、解毒通络调肝方对 SD大鼠一般状态、体质量、饮水量及糖、脂代谢的影响
对照组 SD大鼠一般状态良好，体重上升平稳，饮水正常，模型组 SD大鼠一般状态差，体重下降明显，饮水量增加，解毒通络调肝方盐酸二甲双胍组 SD大鼠较模型组一般状态改善，体重下降趋势减轻，多饮改善（P＜0.05，P＜0.01）。FBG及 GSP方面，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠均较模型组改善明显，有较好的降糖效果（P＜0.05，P＜0.01）。FINS方面，与对照组比较，模型组 SD大鼠 FINS水平显著上升（P＜0.05），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠 FINS水平显著下降（P＜0.05，P＜0.01）。HOMA-IR方面，与对照组比较，模型组 SD大鼠 HOMA-IR显著上升（P＜0.01），与模型组相比，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组大鼠 HOMA-IR水平显著下降（P＜0.01）。各组大鼠的 OGTT-AUC结果显示，模型组显著上升（P＜0.01），解毒通络调肝方低、中及盐酸二甲双胍组显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。脂代谢方面，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍可降低2型糖尿病 SD大鼠 TG、CHO、LDL-C、FFA水平（P＜0.05，P＜0.01）,提高 HDL-C水平（P＜0.01）。
2、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织病理形态的影响
SD大鼠胰腺组织 HE染色：对照组 SD大鼠胰腺组织结构完整，边界清晰，排列紧密，胞浆丰富；模型组 SD大鼠结构紊乱，边界不清，排列不规则，胞浆少，胰岛内细胞质染色变浅或呈空泡化现象；解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 SD大鼠胰腺组织病理形态结构较模型组均有改善。
SD大鼠胰腺组织 Masson染色：与对照组比较，模型组 SD大鼠胰腺组织纤维化明显,可见大量胶原纤维沉积，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组较模型组明显改善（P＜0.05，P＜0.01）。
3、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织细胞自噬的影响
运用免疫组织化学法检测，模型组 Beclin-1及 LC3蛋白表达水平较对照组下降（P＜0.01），解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组 Beclin-1及 LC3蛋白表达均较模型组显著上升（P＜0.01）；运用Western Blot法检测，与对照组比较，模型组的Beclin-1及 LC3 II/I蛋白表达下降（P＜0.01），P62蛋白表达升高（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍可升高 Beclin-1及 LC3II/I蛋白表达（P＜0.01），降低 P62蛋白表达（P＜0.05，P＜0.01）；运用 RT-PCR法检测，与对照组比较，模型组 Beclin-1及 LC3 mRNA表达下降（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组Beclin-1、LC3 mRNA表达显著上升（P＜0.01）。
4、解毒通络调肝方对 SD大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响
运用Western Blot检测，与对照组比较，模型组SD大鼠Bax蛋白表达升高（P＜0.01），Bcl-2蛋白表达水平下降（P＜0.01），Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.01），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组可降低 SD大鼠 Bax蛋白表达（P＜0.01）、升高 Bcl-2蛋白表达水平（P＜0.01），降低 Bax/Bcl-2比值（P＜0.01）；运用RT-PCR法检测，模型组较对照组Bax、Caspase-3 mRNA表达升高（P＜0.01） Bcl-2 mRNA表达水平下降（P＜0.05），与模型组比较，解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组可降低Bax、Caspase-3 mRNA表达（P＜0.01）、升高Bcl-2mRNA表达（P＜0.01），降低 Bax/Bcl-2比值（P＜0.01）；运用 TUNEL法检测胰腺组织胰岛细胞凋亡率，模型组凋亡率较对照组显著上升（P＜0.01），与模型组比较解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组均能降低2型糖尿病 SD大鼠胰腺组织胰岛细胞凋亡率（P＜0.01）。
结论：
1、解毒通络调肝方可有效缓解2型糖尿病 SD大鼠一般状态及体重下降趋势，改善多饮情况，以及具有较好的改善糖、脂代谢的作用，并且可缓解2型糖尿病 SD大鼠胰腺组织病理结构的损害。
2、解毒通络调肝方可改善2型糖尿病 SD大鼠胰岛β细胞凋亡情况，其保护胰岛β细胞的作用可能是通过增强自噬实现的。