大白菜遗传转化和CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:simeifang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
大白菜(Brassica rapa L.ssp.Pekinensis)在农作物领域中属于常见的经济型农产品,尤其在中国、日本和韩国等亚洲地区被大面积耕种。随着基因工程技术的发展,农杆菌介导的遗传转化体系和基因编辑技术近年来不断地应用于大白菜育种过程中,加快了大白菜育种进程,同时改良了大白菜性状,为大白菜遗传育种研究奠定了实验基础。本研究建立了稳定高效的大白菜遗传转化体系,并将CRISPR/Cas9系统成功地应用于大白菜基因编辑。(1)试验材料选择大白菜‘C-24’自交系,构建大白菜孤基因BraA1000785超表达载体,通过农杆菌介导法,筛选农杆菌感受态、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮浓度(AS)、外植体侵染时间和超声辅助处理等影响因素。由此建立了大白菜遗传转化体系,转化体系如下:农杆菌感受态:GV3101,菌液OD600=0.5,侵染培养基(DM)添加AS浓度为20 mg·L-1,外植体菌液侵染过程15 min且无需超声处理,共培养培养基(MC)添加AS浓度为20 mg·L-1(共培养暗处理48h),外植体在筛选培养基(MS)中诱导抗性愈伤组织和抗性芽分化。获得的抗性苗首先利用潮霉素引物进行PCR检测,再通过GUS染色进一步鉴定,确定目的片段已成功导入大白菜‘C-24’基因组中,阳性株系通过荧光定量PCR(qPCR)分析BraA1000785基因在大白菜叶片中的表达水平。最终该体系经重复试验验证,平均转化效率为10.83%。(2)本研究在大白菜遗传转化体系的基础上进一步建立了大白菜CRISPR/Cas9基因编辑体系,以大白菜孤基因BraSca000221为靶基因,在T0代抗性植株中基因编辑效率为72%,均为杂合突变体。T0代株系经自交获得28株T1代突变体,其中纯合编辑植株占35.7%,杂合编辑植株占64.3%。以上研究结果表明,通过大白菜遗传转化体系,可以利用CRISPR/Cas9系统对大白菜基因组进行单靶点编辑。
其他文献
国医大师张志远以98岁高龄离我们而去,他毕生献身于中医药事业,从医从教70余年,医术精湛,治学严谨,勤勤恳恳,八十多岁高龄仍能骑自行车;脱稿讲课一上午中间仅休息15分钟,去年秋天还曾
报纸
针对我国农村公路规划与建设管理养护中存在的主要问题,如农村公路建设规范性较差、农村公路建设质量有待提升、缺乏良好的财政支持等,进行全方面研究,并简要介绍提高农村公
随着互联网应用的不断发展,电信运营商在IDC的投入越来越多.电信运营商在IDC建设中,结合电信级服务保障的需求,对安全性、稳定性十分关注.本文分析了电信运营商IDC设计原则,
针对220(250)×1000~1600mm断面直结晶器弧形板坯连铸机生产的板坯中存在的气泡问题,进行了成因及特性分析,并提出了解决气泡问题的方法,取得了初步效果。
在完备的度量空间(X,g)中,分别讨论了两类新型的、满足条件更弱的非线性压缩映射,即通过构造迭代序列,证明此类算子在空间X中不动点的存在唯一性,给出相应的误差估计不等式.
为探求316不锈钢TIG电弧增材制造最佳成形参数,采用不同焊接工艺参数对316不锈钢焊丝进行单道多层墙体成形,试验通过改变焊接电流和焊接速度,考查不同最佳成形参数下316不锈
为使单级斯特林型脉管制冷机在该温区获得应用,设计了一台单级斯特林型脉冲管制冷机,其调相方式采用惯性管、多路旁通、双向进气三者联合调相。利用低温制冷机模拟软件Sage的
目的探讨护理学教师及临床护士在进行上肢周围静脉输液教学时解剖学知识讲授情况,并分析原因与对策。方法采用自行设计的调查问卷对47例护理学教师及56例临床护士就上肢周围
本文利用西藏地区38个气象站1971-2000年近30a的雷暴资料,通过对这些资料的统计分析,对西藏地区多年平均雷暴的地理分布规律、雷暴发生原因及雷暴发生时段进行了初步分析,结
学校的声乐教学作为学校音乐教学的一部分,本身具有一定的难度和艺术特点,所以学生在学习声乐时就会遇到相应的阻碍。因此,声乐教师就要适当的改变声乐教学方法,使学生能够轻