一个家蝇未知功能基因的克隆及其生物信息学分析

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家蝇(Musca domestica L.)属于双翅目昆虫,在世界范围内分布极其广泛。作为一种重要的资源昆虫,家蝇可广泛的应用于化工、农业、医药、食品、化妆品、环保、印染、造纸以及酶固定化载体等领域。目前,国内外学者在家蝇的形态学、生物学、生态学特性、免疫机理和人工饲养应用等方面做了大量的研究,而在分子生物学领域的基础研究则较少。检测发现一个家蝇EST序列(NCBI登录号为:ES608747)在数据库中不存在同源序列,初步判断其基因可能是家蝇特有的未知功能基因,因此对此家蝇未知功能基因(unknown functional gene of Musca domestica,简称UFGMD)的cDNA全长序列进行克隆和分析显得很有必要,可为进一步研究此基因的功能和作用机理打下基础。本文以一已知家蝇EST序列为基础,通过RACE技术克隆得到其cDNA全长序列,采用在线生物信息学软件对其编码蛋白的性质、结构和功能进行预测分析,主要研究结果如下:1.根据已知的ES608747序列设计特异引物GSP1进行5’-RACE反应,克隆得到的UFGMD基因5’端为726bp;再根据已知的5’端序列设计引物GSP2进行3’-RACE反应,得到UFGMD基因3’端为308bp,将UFGMD基因5’端和UFGMD基因3’端进行拼接得到的UFGMD基因cDNA全长序列为824bp。克隆得到的UFGMD基因包含一个588bp的开放阅读框(49bp-636bp),编码的蛋白具有195个氨基酸。2. UFGMD编码的蛋白不具有信号肽序列,不属于分泌蛋白,去除N端甲硫氨酸(M)的氨基酸序列即为成熟的UFGMD蛋白。利用在线分析软件对UFGMD蛋白理论分子量、理论等电点、分子式、氨基酸组成、二硫键、摩尔消光系数、脂溶指数、不稳定指数、亲水性指数和磷酸化位点进行了预测。3.综合二级结构和疏水簇的预测结果,确定UFGMD蛋白含有5个α螺旋和11个p折叠;利用SAM-T08对UFGMD蛋白的三级结构进行预测,在二级结构水平上,UFGMD蛋白具有6个α螺旋和11个β折叠,与UFGMD蛋白二级结构的预测及其相近,仅多一个α螺旋。4.经blastn检测显示:不存在与UFGMD基因同源性较高的序列,但部分区域与S6k和S6k耳的同源性非常高;FASTA检测显示:不存在与UFGMD蛋白同源性在40%以上的序列,结果中仅拟嗜凤梨果蝇(Drosophila pseudoananassae)着丝粒组蛋白(NCBI登录号为:AAL78894.1)属于昆虫蛋白序列,其同源性为27.6%。结合亚细胞定位分析结果,UFGMD蛋白可能在细胞核和高尔基体中发挥作用,其具体功能有待进一步的研究。
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