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苦参碱类生物碱是从苦参、苦豆子等植物中提取出的一类药用生物碱,具有抗菌、抗病毒、抗癌、杀虫等多种功效,目前已经被开发成各类药物.用来治疗癌症、肝炎、急性炎症等多种疾病。另外还作为新型生物农药及一些卫生保健用品的添加剂。在农药应用领域及卫生保健用品市场占有一席之地。但我国苦参产业尚处于生长期,现阶段提取苦参生物碱的技术工艺较多,但较粗放,且对环境的影响很大,不符合“加强环境保护及发展持续性农业”的提出;同时随着人类活动的不断扩展,各种植物资源被破坏,而苦参作为一种很有价值的医用、农用资源被长期采挖,势必造成资源的短缺。为实现该类生物碱的长期可持续利用和目前对其开发研究,本论文研究了: (1)为了为苦参组织培养反季节取材和异地取材,研究苦参植物室内种植技术和组织培养; (2)苦参细胞悬浮培养影响因子及次生代谢产物检测; (3)苦参细胞悬浮培养次生代谢产物杀虫活性研究。主要结果如下:
1.试验表明,用剥皮法处理苦参种子出芽,且发芽率较高,苦参喜欢沙质土壤,用水沙+树根土:1+3或山上黄沙土+树根土:2+1,有条件少加一点基质,苦参幼苗长势比较好,有利于作为苦参愈伤组织培养试材;苦参在土壤含水量60%左右,温度在25-27℃下,用日光灯光照8-14h苦参幼苗长势比较旺盛,有利于苦参组织培养取材。不同外殖体产生愈伤组织的快慢不同,本文选择3种外殖体,苦参嫩茎、幼叶、嫩芽,结果表明,嫩茎产生愈伤组织的时间最快,易于诱导愈伤组织的产生,但继代培养,选用嫩叶诱导的愈伤组织效果最佳。经试验确定组织培养最适改良MS培养基成分为:MS+2,4-D0.8mg.L<-1>+6-BA2mg.L<-1>,pH5.8,蔗糖含量为3%;最适温度是:24℃-26℃。
2.苦参细胞组织悬浮培养是解决苦参资源短缺问题的一个很好的方法,试验结果表明嫩叶产生愈伤组织作为细胞组织悬浮培养最好,易于悬浮培养细胞生长。最适改良MS培养基成分为:MS+2,4-D1.2mg.L<-1>+6-BA2.0mg.L<-1>,pH6.0,蔗糖含量为3%;最适温度是:24℃-26℃,黑暗条件有利于细胞组织生长,但不产生次生代谢产物或产生极微量的氧化苦参碱;光照条件下有利于次生代谢产物产生,经气谱检测发现含有苦参碱,没有检测到氧化苦参碱和槐果碱。
3.试验结果表明,苦参悬浮培养粗提物对供试的四种害虫均表现出一定的触杀活性和拒食活性。对菜蚜的触杀活性最高,其在毒力回归方程、相关系数、LD<,50>值分别为Y=-0.213+2.81×、0.9925、71.48:而对粘虫触杀活性较低。对菜青虫的拒食活性最高,其毒力回归方程、相关系数、LD<,50>值分别为Y=2.073+1.88×、0.9779、35.99;对菜蚜的拒食活性较低,对粘虫的拒食活性要比触杀活性高。考虑到试验所用试虫数量、环境安全和资源的浪费因素,在150g.L<-1>用量下防治效果较好。