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目的:研究γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)诱导Guillain-Barre综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)患者和健康人外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ Tregs)的可行性,探讨利用IFN-γ诱导生成的CD4+CD25+ Tregs治疗与CD4+CD25+ Tregs数量减少相关的疾病如GBS的可能性。方法:(1)磁性活化细胞分选法(Magnetically activated cell sorting,MACS)纯化25例GBS患者与19例健康人外周血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)中的CD4+CD25T细胞和健康人中的CD4+CD25+ Tregs(nTregs)。(2)存在或不存在抗CD3和抗CD28抗体时,采用细胞培养技术用不同浓度的IFN-γ刺激CD4+CD25T细胞3天。(3)用40ng/mL IFN-γ刺激GBS患者和健康人外周血CD4+CD25-T细胞,在O,1,3,5天后收集刺激后的细胞,流式细胞仪检测GBS患者和健康人细胞体系中由IFN-γ诱导的CD4+CD25+T细胞的比例。(4)利用流式细胞仪及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR RT-PCR)分别在蛋白和mRNA水平上检测GBS患者和健康人诱导的CD4+CD25+T细胞中FoxP3的表达。(5)诱导生成的CD4+CD25+T细胞与自体CD4+CD25-T细胞共同培养检测其抑制自体CD4+CD25-T细胞增殖的功能。(6) GBS患者和健康人中诱导的CD4+CD25+T细胞的表型及抑制功能结果分别与健康人外周血中nTregs的表型及抑制功能比较。结果(1)外周血MNC经过MACS法分选纯化后,CD4+CD25-T细胞及CD4+CD25+Tregs纯度在96%以上,达到进行细胞共同培养实验的要求。(2)在IFN-γ刺激下,GBS患者及健康人外周血CD4+CD25T细胞可转化为CD4+CD25+T细胞。(3)IFN-γ浓度不同,刺激后诱导的CD4+CD25+T细胞所占细胞体系的比例即转化率不同,当IFN-γ浓度为20或40ng/mL时,两组之间的转化率无统计学差异且较其它组最高。(4) IFN-γ,刺激时间对CD4+CD25+T细胞的转化率也有影响,当刺激时间为3天时,CD4+CD25+T细胞转化率最高。(5)无论是GBS患者还是健康人,40ng/mL IFN-γ诱导的CD4+CD25+T细胞中FoxP3在蛋白及mRNA水平的相对表达含量较其它组最高,但仍然低于健康人外周血中nTregs。(6)混合淋巴细胞共同培养结果显示,GBS患者和健康人中诱导的CD4+CD25+T细胞能够有效地抑制CD4+CD25-T细胞的增值,40ng/mL IFN-7诱导的CD4+CD25+T细胞抑制能力最强,与健康人外周血中nTregs的抑制能力无统计学差异。结论IFN-γ可诱导GBS患者和健康人外周血CD4+CD25T细胞转化为CD4+CD25+T细胞,当IFN-γ浓度为40 ng/mL,诱导时间为3天时细胞转化率最高,且此条件下诱导 的CD4+CD25+T细胞表型和功能与健康人外周血CD4+CD25+Tregs相当。