论文部分内容阅读
目的：探讨归肝经虫类中药全蝎蛋白水提物(Scorpion protein extract, SPE)、蜈蚣蛋白水提物(Centipede protein extract, CPE)、土鳖虫蛋白水提物(Eupolyphaga sinensis walker protein extract, EPE)及水蛭蛋白水提物(Leech protein extract, LPE)对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的影响及机制。方法：采用液氮快速冻融及丙酮沉淀法提取SPE、CPE、EPE、LPE。采用MTT法检测各药物对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞周期,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法观察细胞凋亡形态,RT-PCR及免疫组化法检测癌基因C-myc、N-ras和抑癌基因PTEN、p53的表达。结果：1、四味归肝经虫类中药SPE、CPE、EPE、LPE均以剂量依赖性方式抑制HepG2细胞增殖,增殖抑制率随提取物药液浓度增高而增加。其中CPE的抑制作用最强,EPE抑制作用最弱。2、各药物的IC50分别为SPE 7.02 mg/ml, CPE 3.07 mg/ml, LPE 9.83 mg/ml, EPE 433.57 mg/ml.3、经IC50浓度药物干预作用24 h,四味归肝经虫类中药提蛋白水提物的抑制作用均不明显,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；48h、72h时四味归肝经虫类中药蛋白水提物均可明显抑制HepG2细胞生长,与对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。4、各组药物作用于HepG2细胞24 h时,与阴性对照组比较,SEP组、CPE组均明显有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.01),EPE组、LPE组均无诱导HepG2细胞凋亡的作用(P>0.05)；药物作用48 h时,与阴性对照组比较,SEP组、CPE组、EPE组、LPE组均显示具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。5、与阴性对照组比较,SPE、CPE、LPE作用后的HepG2细胞周期表现为G0/G1期细胞比例下降,S期与G2M期细胞比例均升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。与阴性对照组比较,EPE作用后G0/G1期细胞比例下降明显,S期细胞比例均升高,G2/M期细胞比例升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。6、与对照组比较,SPE能够下调HepG2细胞N-ras mRNA,上调PTEN mRNA的表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01)；与对照组比较,CPE能够下调HepG2细胞C-myc、N-ras mRNA的表达,上调PTEN mRNA的表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01)；与对照组比较,EPE能够下调C-myc mRNA的表达,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与对照组比较,LPE可下调C-myc、N-ras、p53 mRNA的表达水平,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论：1.以归经理论为指导筛选具有抗肝癌作用的中药有效成分具有可行性。2.归肝经虫类中药全蝎、蜈蚣、土鳖虫、水蛭蛋白水提物体外抗肝癌HepG2细胞作用有差别,攻毒散结归肝经的全蝎、蜈蚣抗肝癌作用要优于破血归肝经的土鳖虫、水蛭。3.通过调控癌相关基因C-myc、N-ras、p53、PTEN的表达,从而抑制肝癌细胞的增殖或促凋亡,可能是归肝经虫类中药抗肝癌的重要分子机制。