黄酮类化合物作为广泛存在于自然界中的一类天然有机化合物,具有多种药理活性,如清除自由基、抗氧化、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗骨质疏松等。此外,许多黄酮类化合物还被证明具有抗HIV病毒活性的作用。然而,由于许多黄酮类活性成分溶解度不高,稳定性低,吸收差,生物利用度低等性质而限制了相关制剂的开发与临床应用。柚皮素(Naringenin)是柚皮苷的苷元,隶属于天然的黄酮类化合物。柚皮素在具有黄酮类活性成分多种多样的药理活性的同时,也存在着黄酮类活性成分理化性质上的缺陷。本研究着眼于柚皮素新型纳米给药系统的构建,以脂质体作为药物传递载体,采用薄层分散法制备了柚皮素脂质体,以期达到增加柚皮素的溶解度,提高其口服生物利用度的目的。同时,针对柚皮素在体内吸收过快的特点,采用麦角固醇(Ergo)对聚乙二醇(PEG)进行修饰,以修饰产物(Ergo–PEG)代替脂质体处方中的胆固醇,制备柚皮素长循环脂质体,以期延长药物在体内的循环时间,为柚皮素制剂研究提供理论基础。本论文共分为以下五个部分:第一章综述该章主要分为两个部分:第一部分根据纳米制剂的分类,对近年来国内外关于黄酮类活性成分纳米制剂的研究进行综述,包括脂质体、聚合物胶束、纳米粒、微乳/自微乳、纳米混悬液以及纳米囊和纳米球等;第二部分对柚皮素的研究进展进行了综述,包括其理化性质、药理活性、制剂研究现状等,为本课题的实验设计提供理论支持。第二章柚皮素纳米脂质体的制备及其体外特性研究本部分实验首先建立了高效液相色谱法测定体外样品中柚皮素含量的分析方法,并考察了柚皮素在不同p H介质(1.2、4.5、6.8)和水中的平衡溶解度,结果显示,柚皮素在水中的平衡溶解度仅为37.64±0.66μg·m L-1,说明柚皮素为难溶性药物。随后,采用薄层分散法制备了柚皮素载药脂质体,以包封率、载药量为评价指标,利用单因素实验和正交实验设计对柚皮素脂质体的处方进行了优化,柚皮素脂质体的最优处方为:磷脂和胆固醇的总量为350 mg,磷脂和胆固醇的比例为6:1,胆酸钠和肉豆蔻酸异丙酯(IPM)的量分别为200 mg和150 mg,柚皮素投药量为20 mg,水化介质为5 m L p H 7.4的PBS溶液。所制得的柚皮素脂质体的包封率可达到72.2%,载药量为2.44%。对最优处方制备的柚皮素脂质体进行体外特性研究发现,所制备的脂质体粒径为70.53±1.3 nm,多分散性指数为0.259±0.078,粒径分布结果与透射电镜观察到的粒子形态结果保持一致。Zeta电位为-37.4±3.2 m V,初步稳定性实验结果表明柚皮素脂质体稳定性较好。此外,体外释药结果表明柚皮素脂质体可以显著提高柚皮素在不同介质中的释放速度,说明柚皮素脂质体能够达到增加柚皮素溶解度的目的。第三章柚皮素PEG化长循环脂质体的制备及其体外特性研究以麦角固醇(Ergo)和聚乙二醇(PEG)为原料合成了Ergo-PEG,并以其代替原处方中的胆固醇,制备柚皮素PEG化长循环脂质体,以期延长药物在体内的循环时间,从而可以更好的发挥药效。采用单因素实验与正交实验设计对柚皮素载药长循环脂质体的处方进行优化,最优处方为:磷脂与Ergo-PEG的总含量为400 mg;磷脂与Ergo-PEG的质量比为1:1;胆酸钠与IPM的质量均为200 mg;投药量与磷脂的质量比为1:10;水化介质为10 m L p H 7.4的PBS溶液。该处方所制备的脂质体包封率高达95.67%,相比于普通脂质体,包封率显著提高。对按照最优处方制备的柚皮素长循环脂质体的粒径、电位、形态、稳定性和体外释药等体外特性进行研究。结果显示,最优处方制备的柚皮素长循环脂质体的平均粒径为168.57±3.8 nm,多分散性指数为0.187±0.048,Zeta电位为-33.5±4.1 m V。初步稳定性实验结果表明长循环脂质体具有良好的稳定性。体外释药的结果显示,72 h内,长循环脂质体在三种介质中的累计释药率均超过90%,说明长循环脂质体增加柚皮素溶解度的效果更好。第四章柚皮素及其脂质体大鼠体内分析方法的建立本章建立了高效液相色谱法测定大鼠血浆中柚皮素含量的体内分析方法,以沉淀蛋白法和酶解法分别处理血浆样品后,分别测定血浆中游离柚皮素的含量(C)和血浆中柚皮素总含量(C’)。液相条件为:流动相30%乙腈磷酸二氢钾缓冲溶液=30:70(以磷酸调p H至1.2),色谱柱Symmetry C18柱,检测波长288 nm,柱温30°C,进样量20μL,流速1.0 m L?min-1。在此液相条件下,对体内分析方法进行了方法学验证,结果显示该方法专属性强,精密度高,回收率高,稳定性好,适用于大鼠血浆中柚皮素含量的测定。第五章柚皮素及其脂质体大鼠体内药动学研究以90 mg·kg-1的剂量对SD大鼠进行口服灌胃等量的柚皮素混悬液、柚皮素纳米脂质体和柚皮素PEG化长循环脂质体以考察其在大鼠体内的药动学特性。结果显示,口服给药柚皮素和两种脂质体制剂后,Tmax分别为0.25 h、0.25 h和0.25 h(未结合药物),0.083 h、0.25 h和0.25 h(总药物),说明柚皮素在体内可以被快速的吸收而达到最大的血药浓度。与柚皮素原料药相比,柚皮素纳米脂质体和柚皮素PEG化长循环脂质体给药后大鼠体内未结合药物的相对生物利用度分别为688.80%和1187.88%,柚皮素总药物的相对生物利用度分别为1343.99%和2090.83%,表明柚皮素脂质体可显著提高柚皮素的体内生物利用度,而且与纳米脂质体相比,PEG化长循环脂质体的效果更佳。对比柚皮素纳米脂质体和柚皮素PEG化长循环脂质体,体内未结合药物的MRT值由9.49±0.44 h增至14.58±0.99 h,t1/2由7.51±0.55 h延长为13.18±1.02h;体内柚皮素总浓度的MRT′分别为值由9.34±0.50 h增长为15.35±1.17 h,t′1/2由7.51±0.55 h延长为13.18±1.02 h,且柚皮素PEG化长循环脂质体的药时曲线下面积AUC′0-48值更大,说明与纳米脂质体相比,柚皮素PEG化长循环脂质体在提高生物利用度的同时,可明显延长药物在体内的循环时间,从而使药物更好的发挥药效。