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急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床常见的急腹症之一,近年来重型胰腺炎发病率逐渐增多,重型胰腺炎死亡率为20﹪,有并发症者死亡率可高达50﹪.在急诊条件下,快速诊断急性胰腺炎存在困难.目前通常采用检测淀粉酶的水平,但其敏感性和特异性由于非高淀粉酶血症的存在而不够理想.最近有研究资料表明,急性胰腺炎病人血尿中胰蛋白酶原-2的水平显著升高,可以作为检测AP的指标.胰蛋白酶原-1,2均由247个氨基酸组成,其中1~15位氨基酸残基为信号肽,16~23位氨基酸残基为酶原活化成胰蛋白酶时被截去的活化肽(Trypsinogen activation peptide,TAP),序列为APFDDDDK.胰蛋白酶原的异位活化是急性胰腺炎的始发环节,TAP作为胰蛋白酶原的激活产物是胰腺炎的早期预测和病情严重程度判断很好的指标.在正常人血清中胰蛋白酶原-1的浓度较酶原-2高,胰腺炎时因炎症导致胰蛋白酶原渗漏到血循环中,同时由于肾小管对酶原-1的重吸收大于酶原-2,尿液中酶原-2的水平比正常值高出百倍,可以更灵敏而特异地检测急性胰腺炎.胰蛋白酶原的基因工程表达目前国内尚无报道.我们从人胰腺噬菌体cDNA文库扩增胰蛋白酶原-1和-2基因,通过对胰蛋白酶原-1和-2基因的5'端四个氨基酸碱基修改为大肠杆菌偏爱的密码子,降低5'翻译起始序列中G/C碱基含量,预测RNA二级结构等一系列基因工程改造,成功构建了蛋白C端带有6×Histidine亲和标记的pBVTrpg-1和pBVTrpg-2表达载体,在大肠杆菌中获得了占总菌体20﹪的高表达.重组胰蛋白酶原-1和-2用Ni-NTA柱纯化,然后进行Western blot验证.由于胰蛋白酶原-2具有更高的应用价值,我们重点对纯化的胰蛋白酶原-2进行复性,经肠激酶活化处理复性胰蛋白酶原-2检测获得了胰蛋白酶活性,比活性近80个BAEE单位/mg,表明基因工程生产的胰蛋白酶原复性后具有天然构象,可以用作抗原制备单克隆抗体,并可用作标准对照及进行生物学功能研究.