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目的：研究正常、糖尿病性关节炎、骨性关节炎软骨细胞之间晚期糖基化终末产物水平的差异性及其对软骨细胞功能的影响，研究AGEs或高糖对软骨细胞活性及细胞外基质表达的影响，为糖尿病性、骨性关节炎的治疗靶点提供理论依据。
方法：(1)临床工作中收集正常关节软骨、骨性关节炎软骨、糖尿病性关节炎软骨于-80°冻箱冻存备用。运用机械分离法与两步酶消化法分离培养正常、骨性关节炎、糖尿病性关节炎软骨细胞，观察三种软骨细胞的生长特性及细胞形态差异；(2)在体外培养三种不同软骨细胞，传至3代后采用RT-PCR方法和westernblot方法分别检测三种软骨组织中AGEs蛋白的表达水平、软骨细胞中AGEsRNA的表达水平。(3)高糖（30mM）或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预处理正常软骨细胞12h、24h、48h、96h后，用CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性与正常软骨细胞增殖活性对比。(4)高糖（30mM）或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预处理正常软骨细胞24h后，采用RT-PCR方法检测不同干预后的软骨细胞及未干预的正常软骨细胞内晚期糖基化终末产物受体（RAGE）RNA表达水平；(5)设置高糖（30mM）干预组或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预组及正常对照组，处理24小时后，用甲苯盼蓝染色和westernblot方法检测三组软骨细胞外基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。
结果：(1)正常软骨细胞贴壁分裂速度快，种植3-4小时后即可下沉贴壁，部分区域软骨细胞呈集落生长，细胞形态呈星形，边缘光滑；骨性关节炎软骨细胞贴壁及分裂速度稍慢于正常软骨细胞，纤维化现象明显，胞浆内颗粒明显；糖尿病性关节炎软骨细胞贴壁速度慢，原代细胞种植48h内处于贴壁初期的圆形，边缘锐利，细胞分裂速度缓慢，12天左右细胞融合率达到80%；(2)正常、骨性关节炎、糖尿病性关节炎软骨细胞中AGEsRNA和组织中的AGEs蛋白表达水平由高到低为糖尿病性关节炎>骨性关节炎>正常，两种关节炎软骨细胞中AGEsRNA表达量与正常对照组间差异具有统计学意义（p＜0.01），两组关节炎软骨细胞AGEsRNA表达量无差异；(3)高糖（30mM）干预组或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预组和未干预组软骨细胞在12h内细胞活性差异无统计学意义，24h后干预组细胞活性低于未干预组且差异具有统计学意义（p＜0.01），48h后，AGEs干预组细胞活性低于高糖干预组且差异具有统计学意义（p＜0.01）；(4)RT-PCR方法检测结果显示：高糖干预组与AGEs干预组的软骨细胞内RAGE的表达水平高于正常组软骨细胞内RAGE的表达水平，且差异具有统计学意义（p＜0.01），干预组间软骨细胞中RAGE的表达水平无差异；(5)未干预组软骨细胞经甲苯胺蓝染色后异染现象较干预组明显，未干预组可见细胞质和细胞外基质被异染成紫红色，提示高糖或AGEs干预组的软骨细胞蛋白多糖表达较少，高糖或AGEs能抑制蛋白多糖的表达，高糖或AGEs干预组的软骨细胞内Ⅱ型胶原表达水平与未干预组相比较差异具有统计学意义（p＜0.01），高糖干预组软骨细胞内Ⅱ型胶原的表达水平与AGEs干预组软骨细胞内Ⅱ型胶原的表达水平没有差异。
结论：(1)糖尿病性关节炎、骨性关节炎软骨细胞和正常软骨细胞的生长特性及细胞形态存在差异，高糖或AGEs可以降低软骨细胞的增殖活性；(2)糖尿病性关节炎、骨性关节炎软骨细胞中晚期糖基化终末产物（AGEs)的表达量高于正常软骨细胞，差异具有统计学意义；(3)高糖和AGEs可以增加软骨细胞内晚期糖基化产物受体（RAGE）的表达及减少细胞外基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。
方法：(1)临床工作中收集正常关节软骨、骨性关节炎软骨、糖尿病性关节炎软骨于-80°冻箱冻存备用。运用机械分离法与两步酶消化法分离培养正常、骨性关节炎、糖尿病性关节炎软骨细胞，观察三种软骨细胞的生长特性及细胞形态差异；(2)在体外培养三种不同软骨细胞，传至3代后采用RT-PCR方法和westernblot方法分别检测三种软骨组织中AGEs蛋白的表达水平、软骨细胞中AGEsRNA的表达水平。(3)高糖（30mM）或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预处理正常软骨细胞12h、24h、48h、96h后，用CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性与正常软骨细胞增殖活性对比。(4)高糖（30mM）或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预处理正常软骨细胞24h后，采用RT-PCR方法检测不同干预后的软骨细胞及未干预的正常软骨细胞内晚期糖基化终末产物受体（RAGE）RNA表达水平；(5)设置高糖（30mM）干预组或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预组及正常对照组，处理24小时后，用甲苯盼蓝染色和westernblot方法检测三组软骨细胞外基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。
结果：(1)正常软骨细胞贴壁分裂速度快，种植3-4小时后即可下沉贴壁，部分区域软骨细胞呈集落生长，细胞形态呈星形，边缘光滑；骨性关节炎软骨细胞贴壁及分裂速度稍慢于正常软骨细胞，纤维化现象明显，胞浆内颗粒明显；糖尿病性关节炎软骨细胞贴壁速度慢，原代细胞种植48h内处于贴壁初期的圆形，边缘锐利，细胞分裂速度缓慢，12天左右细胞融合率达到80%；(2)正常、骨性关节炎、糖尿病性关节炎软骨细胞中AGEsRNA和组织中的AGEs蛋白表达水平由高到低为糖尿病性关节炎>骨性关节炎>正常，两种关节炎软骨细胞中AGEsRNA表达量与正常对照组间差异具有统计学意义（p＜0.01），两组关节炎软骨细胞AGEsRNA表达量无差异；(3)高糖（30mM）干预组或晚期糖基化终末产物（200mg/L）干预组和未干预组软骨细胞在12h内细胞活性差异无统计学意义，24h后干预组细胞活性低于未干预组且差异具有统计学意义（p＜0.01），48h后，AGEs干预组细胞活性低于高糖干预组且差异具有统计学意义（p＜0.01）；(4)RT-PCR方法检测结果显示：高糖干预组与AGEs干预组的软骨细胞内RAGE的表达水平高于正常组软骨细胞内RAGE的表达水平，且差异具有统计学意义（p＜0.01），干预组间软骨细胞中RAGE的表达水平无差异；(5)未干预组软骨细胞经甲苯胺蓝染色后异染现象较干预组明显，未干预组可见细胞质和细胞外基质被异染成紫红色，提示高糖或AGEs干预组的软骨细胞蛋白多糖表达较少，高糖或AGEs能抑制蛋白多糖的表达，高糖或AGEs干预组的软骨细胞内Ⅱ型胶原表达水平与未干预组相比较差异具有统计学意义（p＜0.01），高糖干预组软骨细胞内Ⅱ型胶原的表达水平与AGEs干预组软骨细胞内Ⅱ型胶原的表达水平没有差异。
结论：(1)糖尿病性关节炎、骨性关节炎软骨细胞和正常软骨细胞的生长特性及细胞形态存在差异，高糖或AGEs可以降低软骨细胞的增殖活性；(2)糖尿病性关节炎、骨性关节炎软骨细胞中晚期糖基化终末产物（AGEs)的表达量高于正常软骨细胞，差异具有统计学意义；(3)高糖和AGEs可以增加软骨细胞内晚期糖基化产物受体（RAGE）的表达及减少细胞外基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。