目的:观察亚低温干预下缺氧/复氧星形胶质细胞表达Bcl-2 Bax及GDNF的变化规律,探讨亚低温对脑缺血再灌注损伤的可能保护机制。　　 方法:利用新生24小时内的SD大鼠,取皮层新鲜脑组织,参照McCarthy等的方法加以改进进行星形胶质细胞(astrocyte,AC)原代培养,调整细胞密度为5×105/cm2,接种到含胎牛血清培养基的培养瓶中,置于细胞培养箱内。利用倒置显微镜观察AC生长及分化的形态学变化。7-8天后传代,传至第3代,细胞自然纯化后,采用神经胶质纤维酸性蛋白(glia fibrillary acid protein,GFAP)细胞免疫荧光技术鉴定AC,95％以上为阳性细胞,符合实验要求。将AC分为正常对照组(C)、缺氧/复氧常温组(H/R)、缺氧/复氧亚低温组(H/M+R)。用三气培养箱调节温度37℃,以95％N2和5％CO2造成细胞缺氧,待氧分压降到1％后始记缺氧损伤时间,缺氧8小时后,断开95％N2,接入95％空气,将三气培养箱分别调节温度37℃、32℃培养开始记时复氧时间。每组设复氧4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时6个时间点,建立AC缺氧/复氧模型。MTT比色法测定AC的存活力,作为细胞损伤指标,免疫印迹法半定量检测GDNF、Bcl-2、Bax的变化,Hoechst33342染色法检测星形胶质细胞凋亡情况。采用SPSS16.0统计软件包进行数据分析。　　 结果:　　 1.体外培养AC及GFAP鉴定结果:AC传3代后,细胞呈星形,胞体较大而扁,突起较多而长,里放射状。GFAP免疫荧光细胞化学技术鉴定AC,95％为阳性,胞体呈三角形,胞浆呈绿色,深绿色为强阳性,突起细,胞膜光滑,边界清楚。　　 2.MTT比色法检测AC活力:对照组在不同的时间点间存活力差异无显著性,随缺氧/复氧损伤时间的延长,常温缺氧/复氧组和亚低温组存活力逐渐降低,且各时间点间差异均有显著性,组间两两比较,对照组存活力均明显高于亚低温组及常温缺氧/复氧组,亚低温组存活力均明显高于常温缺氧/复氧组。　　 3.Western blot法检测GDNF:37℃正常氧供时GDNF的表达无明显变化;缺氧/复氧后GDNF的表达量增多,随复氧时间延长呈先增高后降低再增高趋势,表现为双峰现象,与对照组相比差异有显著性;亚低温组GDNF的表达量在各时间点与对照组相比差异有显著性,8h后时间点均较常温缺氧/复氧组增加显著。　　 4.Western blot法检测Bcl-2、Bax:37℃正常氧供时Bcl-2、Bax的表达无明显变化;缺氧/复氧后两种蛋白的表达量均增多;Bcl-2蛋白24h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,48h时间点最高,与对照组相比差异有显著性,Bcl-2/Bax蛋白比值于24h、48 h和72 h时间点分别为1.15、0.81和0.45。与常温缺氧/复氧组比较,亚低温组Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白24h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,Bcl-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.76、1.09和1.01,均较常温缺氧/复氧组增加有统计学意义。　　 5.Hoechst33342检测星形胶质细胞凋亡情况:正常细胞核Hoechst染色的形态呈圆形,淡蓝色,内有较深的蓝色颗粒;而调亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色,或核呈分叶,碎片状,边集,有的形成凋亡小体。与正常对照组比较,常温缺氧/复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,亚低温组8h后时间点凋亡率均较常温缺氧/复氧组减少,结论1.缺氧/复氧造成星形胶质细胞存活力下降,凋亡率增加,亚低温可提高缺氧/复氧星形胶质细胞的存活力,降低其凋亡率。　　 2.亚低温可以抑制缺氧/复氧后星形胶质细胞凋亡,可能与上调Bcl-2/Bax比值有关。　　 3.亚低温能上调GDNF的表达,GDNF的表达水平与Bcl-2/Bax比值具有一定的相关性。