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猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)属冠状病毒科冠状病毒属成员,主要引起猪的传染性胃肠炎(Transmissiblegastroenteritis,TGE)。该病是猪的一种急性、高度接触性传染病,主要临床特征是呕吐、严重腹泻和脱水,各种年龄及品种的猪对本病均易感。其中,二周龄以下的仔猪致死率可达100%。预防该病的主要方法是疫苗接种。而传统疫苗在一定程度上存在着排毒散毒、毒力返祖、免疫效果差、需多次注射等固有缺陷,故研制新型基因工程疫苗预防TGE是当前亟待解决的问题。而TGE保护性抗原基因(Spike gene,S gene)的获得则是研制此类疫苗的前提基础。 本试验用猪睾丸(Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增TGEV自行分离株TH-98,根据Genebank中已发表的TGEV S基因cDNA序列,利用Oligo 4.1程序软件设计并合成两对引物,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),分别扩增出2.1Kb和2.3Kb两个片段,经酶切鉴定后,先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRI和PstI多克隆位点上,构建了重组质粒pUC-S。根据TGEV S基因位点和pUC18的物理图谱,用相应的限制性内切酶进行酶切鉴定分析,证明克隆的重组质粒为TGEV S基因。对克隆的pUC-S基因进行了序列测定,并与其它五个同源毒株(Purdue-115、Miller、TO14、FS772和96-1933)进行了比较,其核苷酸同源性分别达99%、97%、98%、97%和94%;氨基酸同源性分别达99%、97%、97%、96%和93%。证明了TGEV S基因的保守性。 本研究为更深入地对TGEV进行分子生物学研究及基因工程疫苗的研制奠定了重要基础。另外,也为该毒株鉴定提供了一个有效的方法。