干眼(Dry Eye,DE)是一种伴有炎症的眼表面及泪液的多因素疾病,能够导致泪膜渗透压升高、稳定性下降及眼表面上皮损伤,最终引起患者眼部不适及视力下降。干眼的核心机制是由泪液渗透压升高及泪膜稳定性下降共同驱动的,而炎症则是干眼发病机制中的关键要素,任何刺激及破坏眼表面微环境平衡的因素,均可导致泪膜稳定性下降及眼表上皮细胞的非感染性炎症反应。事实上,干眼炎症可发生于任何程度的干眼中,既能作为病因,持续损伤泪腺及眼表上皮细胞、降低泪膜稳定性,又能够作为干眼的结果,加重干眼患者的症状及体征。在2007年国际干眼专题研究会(International Dry Eye WorkShop,DEWS),及2013年国内“干眼临床诊疗专家共识”中,均明确了炎症在干眼疾病的发生发展中的重要作用。目前,治疗干眼炎症应用广泛的药物主要为免疫抑制剂环孢素,其作用机制及临床疗效已被学者深入研究。近年来,国外学者通过临床证明了皮质类固醇激素也能够有效的改善中重度干眼的症状及体征。然而,环孢素的高价格、激素的副作用,都不同程度的限制了其应用价值,因此继续探索干眼炎症潜在的治疗药物在临床中仍然十分必要。非甾体类抗炎药(Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs,NSAIDs)是除糖皮质激素以外的另一大类抗炎药,具有解热、镇痛、抗炎及抗风湿等作用。非留体类抗炎药作用于前列腺素合成过程中的关键限速酶环氧化酶(cyclooxygenases,COXs),从而抑制前列腺素的合成,减少炎症反应。在眼部,非留体类抗炎药被用于白内障术后、屈光矫正术后的抗炎,而这些手术本身即会导致干眼的发生,且此类炎症均属于非感染性的眼表炎症,与干眼炎症相似,而最新的研究指出,干眼患者泪液中前列腺素E2浓度高于正常人群,并与干眼症状成正相关性,进一步提示非留体类抗炎药极有可能是一种潜在的干眼抗炎药物。本研究以探索非留体类抗炎药普拉洛芬治疗干眼的有效性为核心,分为三个部分进行研究。首先,通过建立苯扎氯胺诱导的小鼠干眼模型,检测前列腺素通合成路中的关键因子及干眼相关炎症因子的表达量,探索其与干眼发生发展的关系;其次,应用0.1%普拉洛芬治疗苯扎氯铵诱导的干眼小鼠,评价治疗后前列腺素合成通路及相关炎症因子的改变,探索普拉洛芬治疗在干眼动物模型中的疗效;最后通过多中心、随机、平行、对照的临床试验,以轻中度干眼患者为研究对象,评价普拉洛芬滴眼液的临床疗效,并用印记细胞学与RT-PCR方法检测患者治疗前后干眼炎症因子的表达量。第一部分苯扎氯铵诱导的干眼小鼠模型中前列腺素合成通路及炎症的变化目的探索0.2%苯扎氯铵诱导小鼠干眼模型中炎症及前列腺素合成通路的改变方法将30只正常雄性BALB/c小鼠分为苯扎氯铵组及正常对照组,以右眼为试验眼。苯扎氯铵组小鼠使用0.2%苯扎氯铵每日滴眼2次,每次5μl,持续14天,正常对照组小鼠不做处理。干眼模型建立完成后,裂隙灯下观察两组小鼠眼表面炎症指数、角膜荧光素染色、泪膜破裂时间及泪液分泌量,通过HE染色、K10免疫荧光染色、TUNEL试剂盒检测角膜上皮细胞形态及功能的改变;通过Western Blot及ELISA方法分别检测小鼠角膜中环氧化酶2及泪液中前列腺素E2的表达量;通过RT-PCR检测小鼠角膜中肿瘤坏死因子α、巨噬细胞炎性蛋白2、II型主要组织相容性复合物及细胞间粘附分子1等炎症及免疫相关蛋白分子的表达量结果0.2%苯扎氯铵处理14天后,小鼠眼表炎症指数及角膜荧光素染色升高,泪膜破裂时间下降;角膜中环氧化酶2及泪液中前列腺素E2的表达量显著升高;肿瘤坏死因子α、巨噬细胞炎性蛋白2、Ⅱ型主要组织相容性复合物及细胞间粘附分子1的基因表达水平明显升高。结论0.2%苯扎氯铵诱导的小鼠干眼模型是一个伴有眼表面炎症反应、免疫反应以及前列腺素合成通路激活的混合型干眼模型。第二部分普拉洛芬治疗苯扎氯铵诱导的小鼠干眼模型的疗效评价目的评价普拉洛芬治疗苯扎氯铵诱导小鼠干眼模型的有效性方法将60只正常雄性BALB/c小鼠随机分成4组:正常组、苯扎氯铵组、玻璃酸钠组以及普拉洛芬组,每组15只,均以右眼为试验眼。正常组小鼠不做药物处理,其余四组小鼠使用0.2%苯扎氯铵滴眼液每日滴眼2次,每次5μl,持续14天以建立干眼模型。随后对玻璃酸钠组及普拉洛芬组小鼠分别给予0.1%玻璃酸钠及0.1%普拉洛芬,每日2次,每次5μl,持续治疗10天,随后所有小鼠取角膜标本。在干眼模型建立前、后,以及药物治疗2、4、6、8、10天进行裂隙灯下观察,记录各组小鼠眼表炎症指数,角膜荧光素钠染色、泪膜破裂时间及泪液分泌量等干眼相关临床指标;在治疗后1、3、5、7、9天采集每组小鼠泪液标本。通过HE染色、K10免疫荧光染色、TUNEL试剂盒检测角膜上皮细胞形态及功能的改变;通过Western Blot及ELISA方法分别检测小鼠角膜中环氧化酶2及泪液中前列腺素E2的表达量;通过RT-PCR检测小鼠角膜中肿瘤坏死因子α、巨噬细胞炎性蛋白2、Ⅱ型主要组织相容性复合物及细胞间粘附分子1等炎症及免疫相关蛋白分子的表达量。结果普拉洛芬对苯扎氯铵干眼小鼠眼表炎症程度、角膜染色、泪膜破裂时间等干眼相关临床指标改善作用优于对照组玻璃酸钠,对免疫及炎症蛋白分子如Ⅱ型主要组织相容性复合物、细胞间粘附分子1、对肿瘤坏死因子a及巨噬细胞炎性蛋白2的抑制作用明显优于玻璃酸钠;对前列腺素合成通路中环氧化酶2及前列腺素E2的抑制作用优于玻璃酸钠。结论普拉洛芬通过抑制环氧化酶、前列腺素E2,以及抑制干眼相关免疫炎症蛋白分子的作用,有效治疗苯扎氯铵诱导的小鼠干眼。第三部分普拉洛芬治疗干眼的临床多中心、随机、对照、平行试验目的评价0.1%普拉洛芬治疗轻中度干眼患者的临床疗效方法本试验为前瞻性、多中心、平行、随机、对照的临床试验。共115名轻中度干眼患者(治疗组与对照组分别为55人和60人)参与并完成试验。患者签署知情同意书后被随机分至治疗组或对照组,治疗组患者给予0.1%普拉洛芬联合0.1%玻璃酸钠滴眼液,每日三次,每次一滴,持续治疗28天;对照组患者给予0.1%玻璃酸钠滴眼液,用法同治疗组,并嘱患者在治疗后7、14及28天回访,进行药物疗效评价。临床评价指标包括干眼症状评分(DESS),角膜荧光素染色(FLCS),泪膜破裂时间(TBUT)和泪液分泌试验(ST1)。治疗组患者在治疗前后分别接受结膜印记细胞学检查,并用RT-PCR方法检测结膜上皮细胞中人白细胞DR抗原(HLA-DR)及细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达量。结果试验组患者经0.1%普拉洛芬联合0.1%玻璃酸钠治疗后,干眼症状、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色均随治疗的进行而逐渐改善。与对照组患者相比,其中角膜荧光素染色与泪膜破裂时间的组间比较在治疗14天及28天差异具有统计学意义。试验组及对照组患者在治疗过程中均未出现严重不良反应。试验组患者结膜上皮细胞中HLA-DR及ICAM-1的基因表达量在治疗后较治疗前均有降低。结论0.1%普拉洛芬治疗轻中度干眼有效、安全且耐受性好,其疗效可能与抑制结膜上皮细胞中干眼相关炎症因子有关。