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背景:氧化固醇结合蛋白(Oxysterol binding protein,OSBP)是一类与氧化固醇具有高度亲和力的受体蛋白。与OSBP结构具有较高同源性的蛋白被称为OSBP样蛋白(OSBP-likeprotein,OSBPL)或者 OSBP 相关蛋白(OSBP-relatedproteins,ORPs)。OSBPLs蛋白在结构和功能上都具有多样性,其主要功能与OSBP类似,可作为转运工具,在细胞的胞质、囊泡以及高尔基体膜之间转运氧化固醇。人类OSBPLs家族包括12个成员,并存在广泛的剪接变异。OSBPL2是其中一个成员。目前OSBPL2的生物学意义主要是参与固醇转运和脂质代谢。已有的研究结果表明,OSBPL2敲低后会导致细胞内25-羟氧化固醇(25-hydroxycholesterol,25-OHC)增加1.9倍。前期研究发现,外源性的25-OHC会导致OSBPL2表达下降,但其机制并不清楚。本文研究的目的旨在探讨25-OHC和OSBPL2转录调控之间的关系。目的:对人OSBPL2基因启动子的结构和功能进行分析,并初步阐明25-OHC参与OSBPL2转录调控的机制。方法:(1)使用不同浓度25-OHC处理HeLa细胞,在mRNA和蛋白水平上检测细胞中OSBPL2的表达情况;(2)通过生物信息学预测,确定OSBPL2的启动子区;(3)扩增并克隆OSBPL2启动子区,初步验证该片段的启动子活性;(4)构建OSBPL2启动子截短体,并通过双荧光素酶报告基因实验确定OSBPL2核心启动子区;(5)利用ChIP实验来验证转录因子与OSBPL2启动子区的结合情况;(6)对该片段潜在转录因子PLAG1和NFYA结合位点进行缺失突变、过表达转录因子和siRNA干扰等,确定核心转录因子结合区;(7)25-OHC诱导HeLa细胞,进行转录组测序分析,寻找调控OSBPL2转录的靶基因和相关信号通路,通过信号通路关键节点分子TP53和SREBF2基因敲低等方法进行验证。结果:(1)随着25-OHC浓度的升高,OSBPL2的mRNA和蛋白水平均呈降低趋势;(2)双荧光素酶报告基因实验结果表明,OSBPL2关键启动子区位于-109 bp～+110bp(即转录起始位点上游109bp至下游110 bp),该区段含有一些常见的转录因子结合位点如TFAP2A、NFYA、NRF、ELK4和PLAG1等;(3)转录因子结合位点的缺失突变和转录因子的过表达研究结果显示,NFYA和PLAG1转录因子对OSBPL2的基础转录起着重要作用;当加入25-OHC时,转录因子NFYA在氧化固醇诱导下被激活,而PLAG1则没有明显变化;ChIP实验也证实NFYA可以结合OSBPL2启动子;(4)转录组测序数据分析的结果中,p53和SREBF2是差异表达基因中的关键节点分子,经实验验证该靶点参与25-OHC对OSBPL2的转录调控。综上结果显示25-OHC是通过p53/SREBF2/NFYA信号通路对OSBPL2实现转录调控。结论:PLAG1和NFYA在OSBPL2的基础转录中起着重要的作用,并且25-OHC可以通过p53/SREBF2/NFYA信号通路来下调OSBPL2的表达,从而为25-OHC和OSBPL2表达之间存在负反馈调节提供一个新的证据。