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[背景]Pim-3是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因。Pim-3在内胚层由来的胰腺癌组织中过度表达,而在其正常胰腺组织中不表达。并且,Pim-3在胰腺癌细胞株中,通过磷酸化凋亡蛋白分子Bad在112位点的丝氨酸,使其失活,释放出抗凋亡蛋白分子Bcl-XL,从而抑制胰腺癌细胞的凋亡,促进肿瘤形成。同时,我们通过RNA干扰技术(Pim-3shRNA)瞬时干扰胰腺癌细胞Pim-3基因表达,可以减弱凋亡分子Bad在112位丝氨酸的磷酸化水平,引起SubG1期细胞数目增加和细胞周期迟缓,从而抑制细胞增殖。这些结果有力证明对于难治性胰腺癌来说,Pim-3是一个很好的靶向治疗分子。但是,在胰腺癌发生发展过程中,以Pim-3为中心的分子调控网络还不完全清楚。[目的]为了进一步阐明Pim-3在胰腺癌发生发展过程中的分子调控网络,发现新的Pim-3激酶作用底物或Pim-3表达调控分子,我们采用酵母双杂交方法筛选与Pim-3相互作用的蛋白,我们成功筛选出翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)。因此本研究目的是探讨Pim-3与TCTP的相互作用关系,明确Pim-3与TCTP相互作用在胰腺癌发生发展中的作用及其分子机制,为临床胰腺癌诊断和预后评估提供理论基础。[方法]酵母双杂交方法筛选出与Pim-3相互作用的蛋白TCTP;免疫共沉淀验证Pim-3与TCTP的直接相互作用关系；免疫荧光染色检测TCTP与Pim-3细胞内共定位；通过瞬时转染和建立稳定过表达与干扰Pim-3细胞系来检测Pim-3对TCTP表达的影响；western blot检测胰腺癌细胞系中TCTP与Pim-3表达以及信号转导通路上相关分子的变化；免疫组化检测人胰腺癌组织标本中TCTP与Pim-3表达；定量PCR检测胰腺癌细胞系中TCTP与Pim-3mRNA的表达水平；放线菌酮脉冲实验检测Pim-3降解速度；CCK-8试剂盒检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡；动物体内异种移植瘤实验检测细胞体内成瘤情况；卡方检验检测TCTP与Pim-3表达与临床病理关系；Spearman相关性统计分析计算TCTP与Pim-3相关性。[结果]1、酵母双杂交方法筛选出与Pim-3相互作用蛋白TCTP,并用免疫共沉淀方法得到验证。2、免疫荧光染色显示TCTP与Pim-3在胰腺癌细胞质内共定位。3、在人胰腺癌细胞系和人胰腺癌组织样本中,TCTP与Pim-3的表达都是成正相关关系。4、上调或者下调Pim-3蛋白表达,对TCTP蛋白的表达或TCTP磷酸化(TCTPser46)水平都没有影响5、过表达TCTP通过抑制Pim-3蛋白降解从而上调Pim-3蛋白表达；干扰TCTP蛋白表达后,通过增加Pim-3的泛素化水平,而加快Pim-3蛋白降解速度,下调Pim-3表达。6、免疫共沉淀结果发现TCTP的N末端与Pim-3的C末端相结合。7、干扰胰腺癌细胞株中TCTP的表达,下调Pim-3表达水平,可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,减缓细胞周期进程,降低裸鼠皮下胰腺肿瘤的成瘤率,抑制裸鼠皮下胰腺肿瘤生长,同时与细胞周期和细胞凋亡的相关蛋白分子Cdc25C, cyclin Bl,phospho-p21T145, Bcl-XL和P-Bad112的蛋白表达也降低。[结论]我们首次发现与Pim-3相互作用蛋白TCTP。在胰腺癌细胞中,TCTP能直接结合Pim-3,并且通过增加Pim-3的蛋白稳定性从而上调Pim-3表达促进细胞周期进程和抑制细胞凋亡,最终导致胰腺肿瘤的发生。因此开发针对TCTP与Pim-3相互作用的靶分子有望成为新的治疗胰腺癌的靶向治疗。