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【目的】以金黄色葡萄球菌肠毒素B为靶物质筛选获得的富集单链DNA文库为起始文库,从中筛选获得能高亲和力和高特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素B的单个DNA适配子,并利用适配子建立的夹心法检测患者血清标本中SEB的含量,辅助诊断金黄色葡萄球菌感染;同时研究适配子在大鼠体内对SEB超抗原活性的抑制作用。【方法】1.将富集文库的筛选产物分别进行扩增、纯化、胶回收和TA克隆转化至大肠杆菌DH5α中,LB液体增菌保存。挑取单个菌落培养,作为菌种保存,抽提质粒,利用相应引物进行PCR扩增,并以羧基磁珠作为分离介质获得单个适配子。2.分别利用地高辛、荧光素和生物素标记的适配子直接测试法,对适配子的结合率和特异性等性质进行鉴定。3.分别采用抗体一适配子夹心法和文库一适配子夹心法,用于SEB的定量检测;同时对两种检测方法进行比对。利用文库一适配子夹心法检测临床患者血清中SEB的含量。4.将大鼠随机分成4组,分别进行不同的干预和处理;随后检测各组大鼠血清中IL-4, IL-6, ALT, AST,肌酐和尿酸的含量,并对各组检测结果进行分析。【结果】1.筛选产物进行克隆和增菌培养后,选择其中40个克隆子进行了检测,共获得了30个条带位置正确的适配子,并从中筛选得到了一条结合力和特异性均较好的适配子。2.文库一适配子夹心法和抗体一适配子夹心法均可用于SEB的检测,且两种检测方法的结果无统计学差异。而健康对照组与细菌感染组血清标本中SEB的含量具有统计学差异。3.适配子在大鼠体内对SEB超抗原活性具有一定的抑制作用,可有效抑制IL-4和IL-6的分泌,并能降低血清中AST, ALT,尿酸和肌酐的含量。【结论】本实验成功筛选到了针对SEB的高亲和力和高特异性的ssDNA适配子,建立了文库一适配子夹心法可以对血清标本中SEB的含量进行检测。适配子的作用类似于抗体,能够与SEB特异性的结合,它可以作为金黄色葡萄球菌感染的检测分子和治疗药物,具有潜在的使用价值。