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目的:研究亨廷顿舞蹈病蛋白(Hungtingtin, Htt)氨基端片段Htt-552蛋白能否通过CMA途径进行降解;研究Htt-552与CMA途径作用的位点并探讨CMA选择性降解Htt-552的机制。方法:采用腺病毒介导野生型与突变型Htt-552片段转染的方法构建HD的细胞模型。利用免疫荧光标记法检测Htt-552蛋白在细胞内表达的水平,采用MTT法以及LDH法测定腺病毒Htt-552对细胞生存率的影响。Western Blot法检测使用大自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)对Htt-552片段在细胞蓄积的影响。Western Blot法及免疫荧光双标记法检测不同饥饿时间引起的不同自噬的最大自噬活性对蓄积的Htt-552片段表达水平的影响。免疫共沉淀和免疫荧光双标记法检测Htt-552片段与CMA通路的组成蛋白LAMP-2A和Hsc70的相互关系。Western Blot法及免疫荧光双标记法检测通过转染外源基因和RNA干扰改变CMA水平对Htt-552片段在细胞里表达水平的影响。Western Blot法检测分离的溶酶体对Htt-552片段的摄取与降解能力。免疫共沉淀以及免疫荧光双标记法检测了在突变了与Hsc70识别位点后,Htt-552片段通过CMA的降解情况,从而研究CMA降解Htt-552片段的机制。结果:腺病毒成功介导野生型与突变型Htt-552片段在细胞中表达,其在细胞内主要分布于细胞浆,细胞核内表达较少。3-MA可使Htt-552在细胞内的蓄积量明显增加,而NH4Cl可更显著的提高细胞内Htt-552片段的蓄积。饥饿6小时和12小时会分别最大限度地激活大自噬和CMA,在这两个时间点可以观察到蓄积的Htt-552片段减少。Htt-552与LAMP-2A和Hsc70有很好的共定位并观察到Htt-552片段与Hsc70的免疫共沉淀现象。激活CMA能使Htt-552片段的蓄积减少,而降低CMA活性会使Htt-552片段的蓄积增多。成功分离小鼠肝脏中的溶酶体并观察到溶酶体能够摄取和降解Htt-552片段。带有100Q的Htt-552片段不易穿过溶酶体膜从而更多的蓄积在溶酶体膜上,而带有18个polyQ的野生型Htt-552片段则更容易进入溶酶体腔中被酶类所降解。突变了两个Htt-552片段上的Hsc70所识别的“KFERQ”相似位点,并证实突变Htt-552片段上的CMA识别位点能够显著降低Htt-552的降解。说明Htt-552片段上存在CMA的识别位点。结论:Htt-552片段存在潜在的CMA识别位点,Hsc70通过识别位点与Htt-552相互作用,Htt-552片段通过溶酶体膜蛋白LAMP-2A进入溶酶体腔中被水解酶类降解,Poly-Q延长后, Htt-552进入CMA途径受阻,造成突变huntingtin细胞内蓄积。这些发现为寻找HD的治疗方法提供了新的思路。