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目的1对己内酰胺环进行替换和改造,获得Capuramycin同系物,以期产生具更高成药价值的前体化合物;阐明负责内酰胺环连接的酶的催化机制,为未来以组合生物合成的方式构建“非天然Capuramycin同系物库”提供有益信息。2获得的Albomycin生物合成信息,为此类化合物生物合成模式的建立提供依据;研究负责铁色素生物合成及耦合的酶,阐明其作用机制,为应用基因工程、组合生物合成、以及半合成等策略建立一个“高铁霉素”同系物库提供依据。方法1目的基因的灭活与互补,微生物发酵,A-503083F的分离纯化,原生质体转化,蛋白的异源表达及分离纯化,体外酶催化,HPLC检测酶活。2微生物发酵,目的基因的灭活与互补,Albomycin铁色素的分离纯化及鉴定,原生质体转化,铁色素的异源表达及分离纯化,HPLC检测。结果1运用基因敲除及组合生物学的技术手段成功获得Capuramycin A-503083F的生产菌株;依据Capuramycin的化学结构,采用底物添加等手段优化发酵条件,并采用SP-207、HW-40F及HPLC联用分离纯化获得了503083F纯品;对目的基因进行异源表达,并将目的产物进行体外酶催化,对催化反应进行HPLC分析,已确证反应发生。2依据Albomycin生物合成信息,分离纯化获得了Albomycin的铁色素部分,为组合生物合成Albomycin铁色素作标准品对照。运用基因敲除及组合生物学的技术手段,对铁色素生物合成基因簇进行异源表达,采用底物添加及调PH值等手段优化了工程菌株发酵条件,为构建铁色素生物合成体系奠定基础。结论1在发酵过程中采取底物添加及调PH值等手段可优化菌株发酵条件。2采用宿主S.lividans TK-64可进行Cap W和Albomycin铁色素的异源表达。3本研究初步阐明负责内酰胺环连接的酶的催化机制,并通过体外酶催化反应获得Capuramycin同系物,证明了体外构建“非天然Capuramycin同系物库”的可能性。4初步获得的Albomycin铁色素生物合成信息,为构建“高铁霉素”同系物库提供有益信息。