杞参膏联合角膜局部氧疗对干眼模型小鼠抗凋亡作用的实验研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong479
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目的:观察杞参膏联合氧疗法对苯扎氯铵诱导的干眼症模型小鼠泪腺组织中细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨杞参膏联合氧疗法对干眼症模型小鼠抗泪腺细胞凋亡的作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠,48只,采用随机数字表法将小鼠随机分为6组,分别为:空白组,模型组,玻璃酸钠组,氧疗组,杞参膏组,杞参膏+氧疗组,每组8只。除空白组外,其余各组小鼠以0.2%苯扎氯铵溶液局部滴眼,5ul/眼,2次/日,连续6周,诱导小鼠干眼模型。造模6周后,对各组小鼠进行模型评价,检测各组小鼠的泪液分泌量(SⅠT)、泪膜破裂时间(BUT)及角膜荧光素染色(FL)。造模成功后,模型组小鼠不予处理;玻璃酸钠组给予0.1%玻璃酸钠滴眼,每天三次,每次5u L;氧疗组行角膜吸氧疗法。给氧方法:采用吸氧治疗的小鼠均给予角膜吸氧,眼部常规清洁处理后,用1%的水合氯醛将小鼠麻醉,用自制的吸氧面罩一端至于小鼠眼部,另一端连于医用氧气,将氧气湿化瓶内装1/2注射用水,氧流量为4 L/min,每次吸氧20 min,每天一次。杞参膏组采用自制的杞参膏对小鼠进行灌胃给药,每次0.34ml,每日一次;氧疗+杞参膏组指同时进行吸氧和杞参膏灌胃治疗。所有干预因素均连续施加3周。末次干预后2h,用1%水合氯醛对小鼠进行腹腔注射麻醉,测定SⅠT、BUT及FL。检测之后用镊子摘取小鼠双侧泪腺浸泡在4%多聚甲醛溶液中。采用免疫组织化学法(ICH)和免疫印迹(WB)的方法检测泪腺组织中的bax、bcl-2、caspase-3;用TUNEL法检测泪腺细胞凋亡率。结果:1.造模后对各组小鼠进行检测,结果显示:与空白组比较,其余各组小鼠SⅠT、BUT检测显著减少,FL检测显著增加(p<0.01),差异有统计学意义。2.治疗后分别对各组小鼠进行SⅠT、BUT、FL检测。SⅠT检测结果:氧疗+杞参膏组>杞参膏组>玻璃酸钠组>氧疗组>模型组,比较模型组和氧疗组,参膏组和氧疗+杞参膏组之间p>0.05,差异无统计学意义,其余各组进行组间比较p<0.05,差异均有统计学意义。BUT检测结果:氧疗+杞参膏组>氧疗组>杞参膏组>玻璃酸钠组>模型组,模型组和玻璃酸钠组进行比较,p>0.05,差异无统计学意义,其余各组间进行比较p<0.05,差异均有统计学意义;FL检测结果:氧疗+杞参膏组<氧疗组<杞参膏组<玻璃酸钠组<模型组,模型组和玻璃酸钠组进行比较,p>0.05,差异无统计学意义,其余各组间进行比较p<0.05,差异均有统计学意义。3.用TUNEL染色的方法检测各组小鼠细胞凋亡的数量,空白组<氧疗+杞参膏组<杞参膏组<氧疗组<玻璃酸钠组<模型组,比较模型组和氧疗组,参膏组和氧疗+杞参膏组(p>0.05),差异无统计学意义,其余各组进行组间比较(p<0.05),差异均有统计学意义。4.各组小鼠用ICH和WB检测泪腺细胞凋亡蛋白bax,bcl-2和caspase-3,其中bax和caspase-3检测结果为:空白组<氧疗+杞参膏组<杞参膏组<氧疗组<玻璃酸钠组<模型组,比较模型组和玻璃酸钠组,参膏组和氧疗+杞参膏组之间p>0.05,差异无统计学意义,其余各组进行组间比较(p<0.05),差异均有统计学意义。bcl-2检测结果为:空白组>氧疗+杞参膏组>杞参膏组>氧疗组>玻璃酸钠组>模型组,比较模型组和玻璃酸钠组,参膏组和氧疗+杞参膏组之间p>0.05,差异无统计学意义,其余各组进行组间比较(p<0.05),差异均有统计学意义。结论:1.氧疗可改善干眼小鼠体征:增加泪膜破裂时间,减少角膜荧光素染色。2.杞参膏可改善干眼小鼠体征:增加泪膜破裂时间,减少角膜荧光素染色;3.氧疗在增加泪膜破裂时间和减少角膜荧光素染色治疗效果优于杞参膏,两者结合使用优于单纯杞参膏和单纯氧疗的使用。4.氧疗有抗干眼小鼠泪腺细胞凋亡的作用,作用机制可能是通过下调bax、caspase-3;上调bcl-2蛋白表达而实现的。5.杞参膏有抗干眼小鼠泪腺细胞凋亡的作用,作用机制可能是通过下调bax、caspase-3;上调bcl-2蛋白表达而实现的。6.在抗干眼小鼠泪腺细胞凋亡的作用方面,杞参膏作用优于氧疗,两者结合与单纯杞参膏相比较,疗效差异不大。
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