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目的:利用体外诱导小鼠骨髓细胞获得的高纯度肥大细胞,探讨IL-4参与诱导获得的肥大细胞NK-1R和FcεRⅠα的表达情况;建立神经肽P物质介导的肥大细胞脱颗粒模型,初步探讨P物质除通过其特异受体NK-1R调控肥大细胞脱颗粒外是否还存在FcεRⅠα介导的途径。方法:1.从Balb/c小鼠股骨提取骨髓细胞,分不同浓度IL-4诱导组即100ng/ml干细胞因子(stem cell factor,SCF)、15ng/ml IL-3以及0,10,15,20,25ng/ml IL-4进行体外培养。每周换液,将悬浮细胞移入新的培养体系。倒置显微镜观察并记录细胞生长情况。2.四周后收集各组细胞及上清液,进行甲苯胺蓝染色、流式细胞术检测CD117鉴定肥大细胞,流式细胞术以及Western Blotting分析不同组骨髓肥大细胞FcεRⅠα和NK-1R表达情况。3.经鉴定培养成功的骨髓肥大细胞中分别加入不同浓度P物质(0、0.01、0.1、1、10μg/ml)孵育半小时,检测上清液和细胞内组胺含量,计算组胺释放率。结果:1.不同浓度IL-4诱导组(100ng/ml SCF、15ng/ml IL-3以及0,10,15,20,25ng/ml IL-4)均可诱导获得肥大细胞。2.其中SCF、IL-3和IL-4共同诱导组获得的肥大细胞FcεRⅠα和NK-1R的表达高于单纯SCF和IL-3组(0 ng/ml IL-4诱导组);而20ng/ml IL-4诱导组肥大细胞表面FcεRⅠα和NK-1R表达达最佳状态。3.20ng/ml IL-4诱导组肥大细胞可被低浓度P物质(0.01μg/ml)激活进而发生脱颗粒,其组胺释放率与SP浓度呈正相关;0 ng/ml IL-4诱导组肥大细胞表达FcεRⅠα但是几乎不表达NK-1R,此时在高浓度SP(1μg/ml)作用时肥大细胞仍可产生应答。结论:初步验证P物质调控肥大细胞脱颗粒存在其特异受体NK-1R介导的非免疫性以及FcεRⅠα介导的免疫性双途径,为下一步研究肥大细胞脱颗粒机制奠定基础,从而为变应性及非变应性炎性疾病的诊治提供新思路。