泽漆,是一种具有广泛应用价值的中草药,之前许多关于泽漆的研究主要集中于其生物学特征,化学成分,药理作用,营养生长,乳汁管的发育,乳汁管细胞的超微结构及其乳汁的蛋白组学等方面,目前还未见有关于乳汁管中原生质降解机理方面的详细报道。溶酶体自噬途径是真核细胞内代谢蛋白质与衰老、受损细胞器的重要途径之一,在生物体的细胞发育、免疫、组织重塑及环境适应等方面有非常重要的作用。网格重链蛋白和APs β-类衔接蛋白是两种与溶酶体代谢通路密切相关的蛋白质,网格蛋白主要是负责形成包被,包裹在高尔基体出芽小泡外面而形成初级溶酶体,而APs则是负责招募网格蛋白形成包被,初级溶酶体会与包裹有细胞器或蛋白质的自噬体融合,形成次级溶酶体,又称为自噬溶酶体,溶酶体可以释放出各种酸性水解酶,从而将那些废旧、衰老的细胞器或蛋白降解掉。泽漆乳汁管细胞的原生质降解是否与溶酶体自噬有着密切关系呢?网格重链蛋白和APs β-类衔接蛋白是否参与了溶酶体自噬途径?因此,基于以上问题,本研究以泽漆的乳汁管细胞为研究对象,通过免疫组织化学技术、免疫印迹技术Western Blot以及胶体金免疫电镜技术,对泽漆乳汁管中的网格重链蛋白和APs β-类衔接蛋白分别在组织、分子和细胞水平上进行免疫定位分析,为探讨它们与乳汁管生长发育的关系奠定了基础。研究结果如下：1.通过免疫组织化学观察,确定在乳汁管细胞中含有网格重链蛋白。早期乳汁管细胞正处于分化的早期,所以并没有网格重链蛋白的分布,或含量较少,然后,随着乳汁管细胞的发育,原生质体开始发生降解,细胞内网格重链蛋白的含量也越来越多,并伴随着原生质体降解的整个过程。因而,泽漆乳汁管原生质的降解与网格重链蛋白有着紧密的联系。2.通过Western Blot免疫印迹分析,确定网格重链蛋白和APs β-类衔接蛋白在泽漆乳汁管中有表达,它们相对分子质量分别约为170 kDa和100 kDa,与预测的相对分子质量相吻合。3.在泽漆乳汁管发育的早期,细胞内原生质浓厚,而且细胞器数量较丰富,包含有大量的线粒体,内质网,高尔基体等细胞器。随着乳汁管发育的进行,细胞内的自噬前体数量逐渐增多,细胞内的线粒体等细胞器被自噬前体包裹形成自噬体,然后与溶酶体小泡融合形成自噬溶酶体,溶酶体酶将其内的细胞器降解,因此在这些细胞器周围有大量的小泡,这些小泡即为溶酶体小泡。通过胶体金免疫电镜技术,我们发现网格重链蛋白和p-类衔接蛋白均分布在溶酶体小泡及其膜上,除此之外,在自噬溶酶体上也有它们的分布。因此,网格重链蛋白和APs β-类衔接蛋白与溶酶体自噬途径有着十分紧密的联系,它们将溶酶体酶分拣装配于溶酶体中,然后通过自噬体与溶酶体的融合参与泽漆乳汁管细胞的原生质降解。