【摘 要】
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为了提高生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)产生的抗生素麦白霉素(Meleumycin)和麦迪霉素(Midecamycin)的产量及有效组分A1含量,本文采用基因组重排技术进行育种实验
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为了提高生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)产生的抗生素麦白霉素(Meleumycin)和麦迪霉素(Midecamycin)的产量及有效组分A1含量,本文采用基因组重排技术进行育种实验,从而获得高产高A1组分融合菌株。本文是以两个遗传背景不同的生米卡链霉菌作为亲本进行基因组重排育种。首先通过对Streptomyces mycarofaciens var.109S自然选育、初筛、复筛得到一株稳定出发菌株B15,效价1900μg/ml左右。B15经紫外线、亚硝基胍组合诱变处理,筛选前体X-1抗性突变株,得到高产变株B64-5,生产能力比出发菌株提高33%,A1组分提高16%。连续传4代生产能力基本不变,较稳定；对高产变株B64-5发酵工艺进行了优化,确定发酵周期为52 h,发酵最佳补加前体X-1时间为0 h,最佳补加剂量为0.3mg/ml。将变株B64-5涂布在10μg/ml安普霉素抗性平板和6mg/ml前体X-1抗性平板上生长,结果表明变株B64-5抗前体X-1,对安普霉素敏感,即X-1rAms。确定变株B64-5(X-1rAms)作为基因组重排育种的亲本甲。将本实验室保存的含双拷贝mdmB基因的生米卡链霉菌重组菌287-53划线于10μg/ml安普霉素抗性平板和6mg/ml前体X-1抗性平板上,挑选对安普霉素抗性,对前体X-1敏感的菌株,即X-1sAmr。选择其中1株编号为12-2(9)(X-1sAmr)作为基因组重排育种的亲本乙。以亲本甲B64-5(X-1rAms)和亲本乙12-2(9)(X-1sAmr)为融合亲本菌株,进行了三轮基因组重排育种,最终获得产量分别提高54%,55%,44%,48%的高产融合菌株GS3-38,GS3-45,GS3-57,GS3-60。
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