近年来,随着我国城市化的进展,养猫的人越来越多,猫的健康问题也引起人们的广泛重视。传染病作为猫的“杀手”之一,向来威胁着猫的健康。本研究通过对南京地区宠物医院的病例统计,发现最常见的猫传染病病原为猫泛白细胞减少症病毒（FPV）、猫杯状病毒（FCV）和猫疱疹病毒（FHV-1）。对南京地区这三种病毒进行流行病学调查,分析了品种、性别、年龄、季节对其发病情况的影响。同时开发了荧光定量PCR方法检测这三种病毒,评估了方法的特异性、敏感性和重复性,并用于临床样本的检测。本研究建立的荧光定量PCR方法能快速准确地对疾病进行鉴别诊断,大大提高诊治效率,对临床上猫病的检测与防控具有重要意义。试验一、南京地区猫三种病毒流行病学调查对南京市2018年2月-2020年2月宠物医院的2214份就诊病例进行统计。结果显示共有猫传染病402例,其中FPV占传染病的9.95%,FCV占35.32%,FHV-1占11.94%。进一步分析发现,纯种猫较田园猫更易患病。性别对发病率的影响不显著。一岁以内的幼猫较成年猫易感,其中2-3月龄猫是最高发的群体,患FPV、FCV和FHV-1的比例分别占50%,36.23%和46.67%。另外FPV在秋季发病率最高,FCV和FHV-1发病率则无明显季节性。试验二、猫三种病毒单重Real-time PCR方法的建立本实验针对猫三种常见传染病,建立单重Real-time PCR检测方法。首先在GenBank中下载这三种病毒所有亚型并进行序列比对找到基因保守区,在保守区内根据一定原则设计3对特异性引物和探针,然后建立起三个单重Real-time PCR方法。反应体系为20μL,其中引物浓度为0.4μM,探针浓度0.1 μM。反应程序如下:95℃预变性2min,95℃变性10s,54℃退火延伸30s,40个循环。对方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示,本方法只能识别特异性模板,不与其他常见动物病原产生交叉反应。三个病毒的检测限为5×101copies/μL,比常规PCR敏感10-100倍,敏感度极高。批内变异系数小于1%,批间变异系数小于2%,重复性良好。试验三、猫三种病毒三重Real-time PCR方法的建立在单重Real-time PCR方法的基础上,优化了引物浓度、探针浓度和退火温度,建立了三重Real-time PCR方法同时检测这三种病毒。优化的引物浓度为0.45μM,探针浓度为0.05μM,退火温度为56℃。建立的三重方法特异性强,敏感度为5×101copies/μL,批内变异系数小于2%,批间变异系数小于3%,重复性好。为了探索方法的实用性,我们建立了共感染模型,结果显示该方法能灵活的检测不同浓度的病毒的随机组合。在临床样本的检测中,三重Real-time PCR方法的阳性率为70.83%,高于商业试剂盒的62.5%,且所有阳性样品也通过测序证实。