甘油磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰乙醇胺的制备与纯化

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甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine, L-α-GPC,本文中简称GPC)和甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha glycerylphosphorylethanolamine, L-α-GPE,本文中简称GPE)分别是磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)的水解产物,是人体内天然存在的代谢物。GPC和GPE均具有特殊的性质和生理功效,可应用于食品、医药等领域,尤其是在医药级磷脂产品方面具有十分广阔的市场前景,如老年痴呆症治疗药品,脑部神经治疗药品等。论文主要对GPC和GPE的制备与纯化进行系统研究。以大豆粉末磷脂为原料,首先研究了甲醇钠催化的醇解反应,制备出含有GPC和GPE的混合物。通过探讨粉末磷脂/无水甲醇料液比(W:V,g/mL)、催化剂添加量、反应温度、反应时间等影响因素对原料中PC和PE的转化率的影响规律,确定了甲醇钠催化醇解粉末磷脂的反应条件:料液比(W:V, g/mL)为1:4,甲醇钠添加量5.0%,反应温度35 oC,反应时间6 h。经检测,反应后GPC的得率为93.60%,GPE的得率为88.69%。采用以离子交换树脂为分离介质的柱层析法及活性炭脱色法,对粉末磷脂的醇解反应液进行分离纯化。通过筛选,确定了D001树脂为第一层析柱的分离介质,201×7树脂为第二层析柱的分离介质。重点研究了两根主要层析柱分离纯化GPC和GPE及活性炭脱色的工艺,考察了各工艺参数对纯化效果的影响,确定了最佳的吸附、解吸和脱色条件:D001层析柱,流动相为无水甲醇,上样量应低于570 mL反应液/100 mL湿树脂,洗脱剂为5倍柱体积的甲醇,解吸剂为中性水;脱色处理:采用颗粒状活性炭,活性炭添加量为0.5 g/100 mL D001柱解吸液,脱色温度60 oC,脱色时间2 h;201×7层析柱,流动相为水,上样量低于600 mL脱色液/100 mL湿树脂,解吸剂为体积分数1%的乙酸溶液,流速均控制在1.5 mL/min。GPC粗溶液经过D113柱的进一步纯化,经过旋转蒸发和真空干燥后,所得GPC样品纯度可达97.11%,回收率为84.82%,GPE解吸液直接经过脱溶和真空干燥后,所得GPE样品纯度可高达99.88%,回收率为78.01%。本工艺路线的确定为工业化生产提供了一定的理论依据。
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