目的:评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在临床常见丝状真菌鉴定中的应用价值。方法:收集2017年4月到2019年2月湖南师范大学附属一医院(湖南省人民医院)各种类型临床标本中分离培养的29株丝状真菌,以及北京协和医院检验科微生物实验室惠赠的26株丝状真菌。对这55株丝状真菌通过传统形态学鉴定、DNA测序及MALDI-TOF MS鉴定方法后,以DNA测序结果为标准,与另外2种方法的鉴定结果进行统计学比较,评价MALDI-TOF MS在临床丝状真菌鉴定上的应用。结果:在28℃和35℃条件下培养的丝状真菌,使用质谱仪鉴定后,经过χ~2检验,得出P>0.05,提示培养温度差异无统计学意义;以DNA测序结果为金标准,传统形态学方法的正确鉴定率为69.1%(38/55),而基于MALDI-TOF MS技术的正确鉴定率可达96.4%(53/55);本研究中,使用“甲酸乙腈提取法”提取蛋白后,丝状真菌质谱鉴定的正确率为83.6%(46/55),而“磁珠研磨法”提取蛋白后的质谱鉴定率则为96.4%(53/55)。结论:临床常规工作中使用质谱仪鉴定丝状真菌时,培养温度不会影响质谱鉴定结果;改良“磁珠研磨法”提取蛋白后质谱仪鉴定的正确率优于质谱仪推荐“甲酸乙腈提取法”;MALDI-TOF MS技术在丝状真菌的鉴定上,相比于传统形态学鉴定来说,该技术更快速、客观、高效及准确。