新城疫病毒F蛋白七肽重复序列6-alpha螺旋束的装配与特征鉴定及其功能分析

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新城疫病毒同其它大部分囊膜病毒一样,在融合蛋白(F)中具有两个七肽重复序列区(HR).其它囊膜病毒的两个七肽重复序列区可形成具有Coiled Coil结构的异源三聚体.它在病毒介导的融合过程中起关键作用.但仍不清楚NDV是否具有与其它病毒相同的融合机制.在该文中,我们克隆、表达了GST融合形式的HR蛋白,并纯化了融合和非融合形式的HR蛋白.等摩尔纯化的HR1和HR2混合后可形成约40KD的蛋白.质谱分析,凝胶过滤层析分析和SDS-PAGE电泳结果表明这个40KD的蛋白就是HR1和HR2混合后形成的三聚体.圆二色谱(CD)分析结果表明:HR1在208nm和222nm有明显的双负峰,具有明显的α-螺旋特征.我们还在HR1、HR2的CD谱,三聚体形成能力和病毒融合抑制能力等几个方面对F48E9强毒株和长春弱毒株进行了比较,结果表明,强弱毒株没有显著的差异;但在α-螺旋热稳定上,弱毒株的Tm(Temperature melting)比强毒株高10℃(强弱毒株的HR1α-螺旋的Tm分别为(40℃和50℃),将进一步研究这一差异对病毒的影响.
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