超声辅助低共熔溶剂提取玫瑰花色苷及其抗氧化性和稳定性研究

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玫瑰花作为一种集观赏与药理价值为一体的花卉,含多酚,黄酮,以及纤维素等生物活性物质。其中,玫瑰花色苷是一种天然色素,颜色艳丽且对p H敏感,可以根据需求调节不同的颜色,具有广泛的应用前景和市场。但是,传统溶剂提取玫瑰花色苷的方法效率低、污染严重,同时花色苷在光照,高温、碱性环境中稳定较差。因此本文利用绿色高效的超声辅助酸性低共熔溶剂(DES)法提取玫瑰花色苷;并对其进行改性,以提高玫瑰花色苷的抗氧化性和稳定性。主要内容如下:1.以衡水丰花1号为原料,粉碎后分别采取超声辅助DES法和传统提取溶剂乙醇对玫瑰花色苷进行提取。建立了由氯化胆碱-乳酸制备的DES对玫瑰花色苷进行提取的工艺,分别考察了含水量、固液比、超声温度、时间、功率以及提取次数等条件对玫瑰花色苷提取量的影响,通过单因素实验优化得到DES提取玫瑰花色苷的最佳工艺条件:DES(氯化胆碱-乳酸)为最佳提取剂,水含量为30%,料液比为1/30 g/m L,在400 W、50℃的条件下超声10 min,使用DES两次提取玫瑰花色苷的积累量达到8.265 mg/g。氯化胆碱-乳酸DES提取量是传统溶剂的1.73倍,在提取过程中酸性溶液对玫瑰花色苷起到良好的固色作用,减少花色苷损失。此外,DES可以回收重复使用,相较于传统提取法更高效和环保。2.利用大孔树脂对玫瑰花色苷进行纯化,通过对比不同树脂的静态吸附量和解吸量,选取了NKA-9大孔吸附树脂对玫瑰花色苷进行纯化。以上样液的含水量、解吸液浓度,解吸液p H值为指标,通过单因素试验确定了NKA-9树脂动态吸附的最佳工艺条件:即以40%含水量的玫瑰花色苷溶液进行吸附上样,以p H1.0的90%乙醇水溶液进行解吸洗脱。上样流速为2 m L/min,洗脱流速为1 m L/min。在此条件下得到玫瑰花色苷的吸附率为79.98%,解吸率为87.15%,回收率为70.55%。3.通过对纯化后的玫瑰花色苷进行高压液相-质谱分析,对比一级、二级碎片离子分析,提取出的玫瑰花色苷主要包含以下几种:矢车菊素-3,5-O-双葡萄糖苷、芍药素-3,5-O-双葡萄糖苷、芍药素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、芍药素-3-(5’-芸香糖苷)-O-葡萄糖苷、飞燕草素。与以往研究不同的是,本研究在玫瑰中检测到大量的芍药苷片段,含量为84.21%。芍药苷-3,5-O-双葡萄糖苷单体含量高达65.93%。4.通过对纯化后的玫瑰花色苷的进行酰基化改性来提高玫瑰花色苷的稳定性。以酰化率为指标,考察了供体种类、反应温度、时间、酶的用量以及供体添加量对酰化率的影响。通过单因素优化实验确定的酰基化工艺为:以0.25 g花色苷溶于2.5 m L吡啶,加入4 m L苯甲酸甲酯混匀后加入400 mg诺维信脂肪酶,在50℃水浴,0.09 Mpa负压反应9 h。高压液相测定其酰化率为95.13%。对酰基化前后玫瑰花色苷的光照、温度和p H的稳定性研究。结果表明在避光孵育12 h后,酰基化玫瑰花色苷在20℃和40℃条件下稳定。在60℃条件下,天然花色苷损失率高达46.19%,而酰基化花色苷的损失率为11.52%。酰基化花色苷损失显著小于天然花色苷,在高温下酰基化后的花色苷更具有稳定性,不易失活。避光、自然光,日光灯条件下放置12 h,花色苷损失率依次为23.97%、26.06%、50.00%,花色苷随着光照条件加强损失率增大,说明花色苷在光照条件下不稳定。花色苷酰基化后损失率依次为0.80%、9.26%、21.97%,酰基化花色苷的损失率显著降低。酰基化后花色苷对高p H溶液仍有红移现象,表明其具有更好的p H稳定性。上述结果表明,玫瑰花色苷酰基化可以有效提高其温度、光照和p H稳定性。5.研究了酰基化前后玫瑰花色苷对DPPH、ABTS自由基的清除能力。结果表明随着天然花色苷和酰基化花色苷浓度的提高,它们对DPPH和ABTS自由基清除效果加强。而且,经过酰基化的玫瑰花色苷清除DPPH、ABTS自由基的能力显著高于天然花色苷,表明酰基化花色苷具有更高的抗氧化性。
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