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目的：通过分析不同HPV感染状态的宫颈癌细胞株在siRNA沉默HPV16E6后细胞内p63蛋白的异构体TAp63a和ΔNp63α在mRNA和蛋白水平上的表达变化,为宫颈癌的发生机制研究提供新的理论依据,为使用RNA干扰技术治疗宫颈癌的可行性提供实验基础。方法：Western blotting检测不同宫颈癌细胞内p63的表达水平；构建HPV16E6的siRNA,转染HPV16,18阳性的CaSki细胞,HPV16阳性的SiHa细胞及HPV18阳性的HeLa宫颈癌细胞；real-time PCR检测沉默前后TAp63α和ΔNp63αmRNA的表达变化；Western blotting检测沉默前后TAp63α和ΔNp63α,p53和p21的蛋白表达变化；使用SPSS17.0进行统计分析。结果：1.p63在C33A,CaSki, SiHa和HeLa细胞内的表达水平：Western blotting检测结果显示,ΔNp63α在C33A, CaSki, SiHa和HeLa细胞内的表达水平分别为1.5486±0.037,1.1523±0.048,0.4967±0.058,0.4367±0.072(P<0.000)。2.转染后SiHa细胞内HPV16E6mRNA的表达水平：RT-PCR结果显示,空白对照组(blank control)、NC组(negative control)、SⅠ组(siRNA303)、S Ⅱ组(siRNA73)和SⅢ组(siRNA191) HPV16E6mRNA表达水平分别为0.6633±0.021,0.6967±0.031,0.2867±0.025,0.2267±0.006和0.2533±0.012,各组间差异有统计学意义(F=270.810,P=0.000)。转染后24小时,SⅠ组、SⅡ组和SⅢ组细胞内HPV16E6mRNA表达水平比阴性对照组(negative control)分别减少了58.8%,67.5%和63.6%,减少有统计学意义(分别P=0.000,P=0.000,P=0.000)。3.转染后TAp63α和ΔNp63αmRNA在CaSki, SiHa和HeLa细胞内的表达边变化：real-time RT-PCR结果显示：TAp63αmRNA在CaSki, SiHa negative control组的表达水平分别为5.17×10-4±6.15×10-5和1.48×10-4±5.59×10-5；在siRNA组的表达水平分别为1.05×10-3±2.24x10-4和4.88×10-4±2.38×10-5；ΔNp63αmRNA在CaSki, SiHa negative control组的表达水平分别为7.64×10-4±2.22×10-5和3.44×10-3±6.08x10-；在siRNA组的表达水平分别为3.23×10-4±1.80x10-5和4.61×10-44±1.29×10-5。沉默前后表达差异有统计学意义(P<0.05)。而TAp63α和ΔNp63αmRNA表达在HeLa细胞中negative contral组和siRNA组的差异则没有统计学意义。4.转染后TAp63α、ΔNp63α、p53和p21蛋白在CaSki, SiHa和HeLa细胞内的表达变化：Western blotting结果显示,TAp63a在CaSki, SiHa细胞的negative control组的蛋白表达水平分别为0.0733±0.031和0.0300±0.010；在siRNA组的蛋白表达水平分别为0.0767±0.006和0.0733±0.032。ΔNp63a蛋白在CaSki, SiHa negative control组的蛋白表达水平分别为0.3767±0.105和0.3267±0.155;在siRNA组的蛋白表达水平分别为为0.1900±0.050和0.1400±0.052。p21蛋白在CaSki, SiHa negative control组的蛋白表达水平分别为0.0767±0.012和0.1600±0.035；在siRNA组的蛋白表达水平分别为0.2367±0.029和0.1433±0.029。p53蛋白在CaSki, SiHa的negative control组的蛋白表达水平分别为0.2333±0.127和0.1433±0.029；在siRNA组的蛋白表达水平分别为0.6200±0.329和0.6300±0.416。沉默前后蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。而TAp63α、ΔNp63α、p53和p21在HeLa细胞中negative control组和siRNA组的表达差异则没有统计学意义。结论：1. siRNA介导的基因沉默能有效的抑制HPV16阳性宫颈癌细胞内E6癌基因的表达。2.p63在不同HPV感染状态的宫颈癌细胞株C33A·CaSik·SiHa和HeLa均有表达,且ΔNp63a的表达水平较高,显著高于TAp63a亚型的表达。3.HPV16阳性的宫颈癌细胞在E6基因沉默后,细胞内ΔNp63α的表达水平下降,TAp63α的表达水平随之升高,说明ΔNp63α在宫颈癌细胞内可能起着癌基因的作用,促进细胞增殖。TAp63α在宫颈癌细胞内可能起着类似于p53的作用,调控细胞周期,促使细胞凋亡我们的实验结果进一步证实ΔNp63a和TAp63α在宫颈癌细胞内的功能是相互拮抗的,两者在细胞内的功能失衡可能是导致宫颈癌发生的重要机制。