呋喃它酮代谢物AMOZ胶体金及荧光猝灭免疫层析检测技术的建立与对比研究

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目的:建立、优化并对比呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉–3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone, AMOZ)的胶体金与荧光猝灭免疫试层析检测方法。方法:将实验室现有的CPAMOZ单克隆抗体标记于胶体金颗粒表面后,喷涂于聚酯膜上,将抗原CPAMOZ-BSA作为检测线(Test line),羊抗鼠IgG作为质控线(Control line)分别包被于硝酸纤维膜上,组装试纸条,优化各实验条件。测定试纸条敏感性,特异性、稳定性及检测时间;将荧光颗粒与抗原CPAMOZ-BSA混合液作为检测线,荧光颗粒为质控线分别包被于硝酸纤维素膜上,制备荧光猝灭试纸条,调整优化各实验条件,测定其灵敏度、检测线性范围、特异性、检测时间,并与胶体金试纸条对比。结果:成功合成出检测抗原CPAMOZ-BSA;制备了平均颗粒直径为20nm胶体金颗粒;成功研制CPAMOZ胶体金与荧光猝灭免疫层析试纸条,其灵敏度分别为10ppb、0.625ppb,荧光猝灭试纸条线性范围是0.3-10ppb;二者检测时间分别为5min、10min,并均与硝基呋喃代谢物AOZ、SEM、AHD及其衍生物均无明显交叉。胶体金试纸条室温可保存1年。结论:本研究成功建立了呋喃它酮代谢物AMOZ两种免疫层析检测方法。与胶体金免疫层析试纸条相比,荧光猝灭试纸条提高了检测的灵敏度、拓宽了线性范围,实现了定量分析。同时荧光猝灭试纸条还保持了胶体金试纸条快速、高特异性、低成本的优点,适合基层大通量筛选使用。
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