用生物物理方法研究3种Red蛋白在真核生物中的表达及定位

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qinslin5043
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本文分两部分实验进行了相关研究。首先对Red基因进行了原核表达及抗体制备,为进一步研究Red基因的功能奠定了良好的基础。其次对Red基因在真核细胞中的表达和亚细胞定位进行了研究。第一部分从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exo DNA的全长序列。将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建三种Red蛋白的表达工程菌,分别制备得针对三种蛋白的特异性抗血清,并用丙酮沉淀菌体蛋白的非特异性排除法纯化了抗体。第二部分实验构建了带核定位信号(NLS)的三顺反子表达载体pCMV-gNIbNIEN。我们利用电穿孔技术摸索出了最佳的电转化条件,最终得到了预期的转化结果,此实验结果为后续研究奠定了坚实的基础。
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