霉茶的化学成分及质量研究 霉茶系葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄（A.megalophylla Diels et.Gilg）的枝叶加工而成,具有降血压、降胆固醇之功效。临床上用于治疗原发性高血压病,疗效显著。霉茶中主要有效成分蛇葡萄素为黄酮类化合物,经药理实验表明,其具有明显拮抗去甲肾上腺素（NA）和高K⁺所致的兔胸主动脉条收缩反应及钙拮抗作用,且毒性低,可作为抗心率失常、抗心肌缺血、抗高血压的新型药物。有关其化学成分的研究较少,质量研究尚属空白,本文对该植物的化学成分和药材质量进行了研究,研究内容包括以下三个方面: 1.文献综述 系统查阅了国内外有关蛇葡萄属植物的文献资料,对我国境内15种蛇葡萄属植物的化学成分、药理活性等方面的研究成果作了简要全面的综述,并结合当前研究成果对其开发前景作了展望。 2.霉茶中化学成分的分离鉴定 霉茶粗粉用95%乙醇提取,浓缩得到的浸膏用适量水混悬,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取。利用正相硅胶、聚酰胺等分离材料,采用常压柱层析法和重结晶法等分离纯化手段,对霉茶主要有效部位——乙酸乙酯萃取部分进行分离、鉴定。从该部分分离得到三个化合物（C₁、C₂、C₃）,根据理化性质、光谱(紫外光谱、¹H核磁共振谱、¹³C核磁共振谱和电子轰击质谱EI-MS)和水解产物分析确定,C₁为:3,5,7,3’,4’,5’-六羟基-2,3-二氢黄酮醇,即蛇葡萄素（Ampelopsin）,C₂为杨梅素（myricetin）,C₃为杨梅苷（myricetrin）,三者均为黄酮类化合物。其中杨梅素和杨梅苷为首次从该植物中分得。经TLC、HPLC面积归一化法检测纯度,符合供含量测定用对照品纯度大于98%的要求,可供研究霉茶主要成分含量用。 3.霉茶的质量研究 以分离得到的蛇葡萄素、杨梅素为对照品,对霉茶及其原植物大叶蛇葡萄（于2004年5月采集于湖北恩施地区）进行了定性和定量鉴别方面的研究工作,具体概括如下: Ⅰ.定性鉴别:湖北中医学院2002级硕士研究生毕业论文 根据霉茶化学成分的特点,选择其特征性成分蛇葡萄素、杨梅素作为定性的指标,建立了专属性鉴别方法。硅胶薄层层析:以甲苯一乙酸乙醋一甲酸（10:8:5）为展开剂,在硅胶G板上上行展开10cm,以5%AIC13为显色剂,在紫外灯 （365nm）下检识,分离效果良好,Rf（蛇葡萄素）=0.29,Rf（杨梅素）=0.41。此外,我们还对其进行了聚酞胺薄膜薄层层析定性鉴别方法研究,也找到了一个比较好的鉴别条件:以80%乙醇为展开剂,在聚酞胺薄膜上上行展开,以5%AIC13为显色剂,在紫外灯（3 65nm）下检识,Rf（蛇葡萄素）二0.62,Rf（杨梅素）二0.21。两种方法均可用于霉茶的定性鉴别。n.总黄酮含量测定: 以蛇葡萄素为对照品,AIC13为络合剂,在3llnm波长处采用紫外分光光度法测定霉茶及其原植物中总黄酮的含量,结果分别为33.72%和40.32%,这样高的含量在植物药中是极其少见的。m.蛇葡萄素和杨梅素的含量测定: 首次采用反向高效液相法对霉茶及其原植物不同部位的黄酮类成分蛇葡萄素、杨梅素的含量进行了测定。由于这两种化合物的保留行为和紫外最大吸收波长不同,本文采用了两种不同的洗脱系统。色谱柱:Zorbax SB一Cl:不锈钢柱 （250mm x 4.6mm,5 pm）,测定条件与结果如下: 蛇葡萄素:流动相:甲醇一水一磷酸（35:65:0.2）;流速:0.7mUmin;柱温:30℃;检测波长:292nm,标准曲线法。蛇葡萄素含量分别为霉茶（273%）、原植物茎（16.81%）和原植物枝叶（29.1%）。该方法线性良好。 杨梅素:流动相:乙睛一水一磷酸（20:80:0.2）;流速:1.omUmin;柱温:30℃;检测波长:254nm,标准曲线法。杨梅素含量分别为霉茶（4.56%0）、原植物茎（2.23%o）和原植物枝叶（2.54%o）。该方法线性良好。 在以上条件下,样品中蛇葡萄素、杨梅素与其他组分取得了较满意的分离。结果表明,霉茶中总黄酮含量和主要有效成分蛇葡萄素含量极高,且黄酮类成分大部分集中在原植物的枝叶中。本文所建立的方法方便、简单、准确,可用作常规分析,也可用作制剂含量的分析。这些为评价与开发利用大叶蛇葡萄资源提供了依据,为建立该植物的质量标准奠定了基础,具有一定的理论和实际指导意义。关键词:霉茶化学成分蛇葡萄素杨梅素含量测定HPLc