论文部分内容阅读
忽地笑（Lycoris aurea(L’Her.) Herb.）是一种多年生草本植物，具有很高的药用和观赏价值。但国内外目前对忽地笑研究重点主要是生物碱，多糖结构和生物活性研究较少。本课题主要进行了忽地笑多糖的提取纯化及体外抗氧化活性研究。 （1）建立蒽酮-硫酸法检测忽地笑多糖含量。用紫外分光光度计（UV）800～400 nm扫描确定最大吸收波长（λmax）=625 nm，线性回归方程为y=8.878x+0.015， R2=0.9990，检测范围为0.01～0.1 mg/mL；方法学考察表明精密度、稳定性、重复性和加样回收率良好。 （2）采用响应面优化分析水和超声波辅助提取忽地笑多糖工艺参数。水提取法最佳工艺：在液料比23:1（mL:g），提取温度70℃条件下提取7.7 h，多糖得率为42.00％；超声波辅助提取最佳工艺：在液料比22:1（mL:g）下超声处理15 min，然后在84℃提取6.9 h，多糖得率为40.95%。 （3）忽地笑多糖的纯化研究。采用732型阳离子交换树脂脱色结果表明：在树脂用量10%，pH为4，温度30℃的条件下脱色2 h，脱色率为65.76%，多糖保留率可达98.61%。Sevage法除蛋白7次时，蛋白质除去率为94.89%，多糖保留率达到78.57%。初步纯化后的多糖经DEAE-52纤维素柱层析，以0、0.1、0.3、0.5 mol/L的NaCl溶液梯度洗脱，得PBL1-1、PBL1-2、PBL1-3和PBL1-4四个多糖组分。 （4）采用凝胶排阻色谱-多角度激光光散射-示差检测法（GPC-MALLS-RI）、高效液相色谱法（HPLC）、红外光谱法（IR）和紫外分光光度法（UV）对PBL1-1、PBL1-2、PBL1-3的结构进行初步研究。结果表明：PBL1-1重均分子量（Mw）为3.642×103 g/mol，PBL1-2重均分子量（Mw）为1.206×104 g/mol，PBL1-3重均分子量（Mw）为3.992×105 g/mol；PBL1-1由D-甘露糖、D-无水葡萄糖、D-半乳糖组成，其摩尔比为1:0.34:0.036。PBL1-2由 D-甘露糖、鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比1:0.29:0.78:21.89:2.69:0.63。PBL1-3由 D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为1:2.63:0.47:1.63:0.83:6.92:1.34。IR检测表明PBL1-1、PBL1-2和PBL1-3主要是吡喃糖环结构。UV分析可知PBL1-2和PBL1-3含少量蛋白质。 （5）通过评价PBL、PBL1、PBL1-1和PBL1-2清除DPPH·、·OH、O2﹣·的能力，结果显示：上述多糖组分均有抗氧化活性，PBL效果最佳，其次是PBL1；PBL1-1清除能力最弱。