【摘 要】
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霍乱毒素与毒素大肠杆菌(ETEC)是引起婴幼儿和旅游者腹泻的主要病原菌。为研制有效的广谱亚单位疫苗，将霍乱毒素B亚单位(CTB)和ETEC的优势抗原之一CS3分别作为抗毒素免疫和抗
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霍乱毒素与毒素大肠杆菌(ETEC)是引起婴幼儿和旅游者腹泻的主要病原菌。为研制有效的广谱亚单位疫苗，将霍乱毒素B亚单位(CTB)和ETEC的优势抗原之一CS3分别作为抗毒素免疫和抗黏附免疫的免疫抗原。由于CTB的载体功能，CTB和CS3融合的形式(CTB／CS3)免疫原性优于单独存在的CTB和CS3单个蛋白，并可达到双抗霍乱弧菌以及毒素大肠杆菌的目的。 植物生物反应器是一种安全和廉价的蛋白生产系统。但是其中一个限制因素是外源蛋白在植物中表达量低。为了优化表达系统，本试验构建了分别将CTB／CS3蛋白定位于细胞质、细胞间质和内质网的pBinCTBatg／CStaa、pBinCTBsp／CStaa、pBinCTBsp／CSkdel植物表达载体及对照载体pBinCTBatg／CSkdel，分别通过农杆菌介导法转化烟草。对再生烟草进行PCR检测，获得了转CTB／CS3基因植株。Western定量分析结果显示，将CTB／CS3定位于内质网的转基因植株表达量远远高于其它类型转基因烟草。 为了使黄瓜作为生物反应器进行抗腹泻口服疫苗的生产，在本试验中利用报告基因β-葡萄糖醛酸酶(GUS)对黄瓜品种649的遗传转化条件进行了优化。在黄瓜转化与再生过程中，选择黄瓜子叶、子叶节作为外植体优于下胚轴。与农杆菌共培养过程中添加乙酰丁香酮(AS)，共培养15min，分化培养基为MS+6-BA(1.0mg／L)+NAA(1.0mg／L)+kam(50mg／L)+Cb(500mg／L)时转化率最高。 根据优化条件，利用杆菌介导法对黄瓜进行pBinCTBsp／CSkdel基因的转化，目前已经获得抗性愈伤组织，部分分化出芽。
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