前言 准分子激光角膜切削术(PRK)已广泛应用于临床，预测性和稳定性较好，是目前治疗近视的最佳手术方法之一。但目前大量的研究证实，氟气体有毒，又由于角膜组织几乎以100％吸收波长低于290nm的紫外线，能产生角膜的毒性反应，体外研究也表明，193nm准分子激光工作时可能产生295—320nm波长的继发激光，可到达晶体、视网膜等组织。而且角膜、晶体等组织易受到氧、光的作用，产生大量自由基，造成细胞损害。故本研究从动物实验入手，通过检测角膜、晶体中自由基的变化，来探讨准分子激光是否对眼组织产生影响。 这为我们探讨准分子激光角膜切削，尤其是高度近视角膜深切削，屈光回退患者行二次补充切削是否产生角膜、晶体损伤，而引起一系列并发症奠定一定的理论基础，同时也为指导临床更加安全、合理、有效地治疗近视提供客观依据。 实验材料与方法 1．实验材料与分组 采用本院动物室提供的成年健康大耳白兔48只(96只眼)，雌雄兼用，其中3只白兔(6只眼)为正常对照组，另45只白兔(90只眼)随机分为三组，每组30只眼，Ⅰ组单纯刮除上皮，不做激光切削；Ⅱ组系统设置为-4.0D，切削深度为48um；Ⅲ组系统设置为-8.0D，切削深度为86um。术后分别观察12h、24h、72h、7d、14d。 2．手术方法 用 SUMMIT公司生产的 SUMMIT APex Plus laser system，应用Software VeGion 3．2 senes中 single zone LASIK with pre眈atment程序。按每公斤体重 10％异戊巴比妥钠 lrnl肌肉注射麻醉后，将兔平放于手术台上。测量并记录角膜中央厚度。l组用圆刃刀机械刮除中央区直径 7rum的角膜上皮，11、且组在此基础上，按预期矫正度数用准分子激光切削角膜基质，术毕滴氯霉素眼药水。 3．观察指标及方法 分别于术后12h、24h＼72h、7d、14d每组各取6只眼，切取中央角膜组织、摘除晶体。用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，测定角膜和晶体中的SOD下SH－PX的活力。 4．统计分析 两组间可行t检验，各组内行方差分析。 实验结果 1．术后不同时间角膜中SOD和GSH－PX活力的动态变化。 经业检验分析，每组SOD的活力在12和24小时、GSH－PX的活力在24小时与对照组相比下降最明显（P＜O．01入叨D活力在术后7和14天、GSH－PX活力在术后14天皿组与1、11两组的差异有非常显著性门＜0．0门，其余各观察值之间无显著性差异河＞O．05太经方差分析，H、且组叨D的活力在术后14天与前几个观察时间相比有显著差异瞩＜队0门，其它各观察时间之间无显著性差异泽＞0．05人 2．术后不同时间晶体中SOD和GSH－PX活力的动态变化。 经t检验和方差分析，SOD下SH－PX的活力在各组和不同观察时间的差异均无显著性河＞O．05八 ·2· 讨 论 PRK术后角膜基质的主要组织病理学改变是术后24小时见切削面下有中性粒细胞浸润，术后4天，基质中仍可见中性粒细胞浸润，但已明显减少，还可见少量巨噬细胞，7天时基质内未见中性粒细胞浸润，可见散在的角细胞。粒细胞在吞噬过程中和被可溶性物质激活时会产生呼吸爆破（resPiration burst厂导致自由基的大量产生。 自由基虽然对生物体产生一定的损害，但生物体又具有一定的防御作用，即不断产生防御自由基损害的物质，包括抗氧化酶类和抗氧化剂类。抗氧化酶类主要有超氧化物歧化酶卜uPeroxidedismutase，SOD入过氧化氢酶＊atalase，CAT）和谷航甘肽过氧化物酶（gutathione Peroxidase，GSH－PX）等，它们能有效地清除自由基。 在我们的实验中，PRK术后各组和不同观察时间角膜、晶体中SOD和GSH－PX的活力均不同，有先下降后升高，逐渐接近对照值的趋势，提示PRK术后角膜和晶体中可能存在着自由基反应的紊乱，自由基清除酶活性下降。／ 我们推测，PRK术后急性期，角膜基质中粒细胞浸润并产生大量自由基，自由基清除酶一方面因清除＊、H。O。等自由基大量消耗，使活性降低；另一方面，激光切削时大量角膜上皮细胞被刮除，使广泛分布于上皮中的自由基清除酶活性降低。术后3天角膜上皮基本愈合，酶活性逐渐回升。经t检验分析，SOD活力在术后 7天和 14天、GSH－PX活力在术后 14天皿组与 I、11两组的差异有非常显著性河＜o．0门，我们认为切削量大的组可能对角膜细胞的损伤相对较重，细胞的功能和酶活性恢复较慢，所以要进行更加深人细致的研究。 ·3· 此外，准分子激光切割角膜时可产生大约130个大气压的压力，也能产生295－－－－320urn波长的继发激光，可到达晶体，这样就可以造成晶体的损害，可能是造成晶体中抗氧化酶活力降低的原因。但经止检验和方差分析，晶体中SOD、GSH－PX的活力在各组和不同观察时间的差异均无显著性（P＞O．05人说明准分子激光对晶体的损伤可能较轻，且是暂时的，不会随着切削深度的加深