论文部分内容阅读
【背景】非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Dnisease,NAFLD)是指除酒精和其他明确的肝损因素外,以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征,包括单纯性脂肪肝(NAFL)以及由其演变的脂肪性肝炎(NASH),肝纤维化和肝硬化。肝纤维化由单纯的肝脏脂质沉积进展而来,是肝硬化的前期阶段,若进展为肝硬化则严重影响患者的肝脏功能。纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是细胞外基质中广泛存在的一种大分子糖蛋白,可以与多种整合素结合,在细胞修复、粘附和迁移活动中发挥重要作用。整合素(Integrins)是细胞表面的粘附受体,由不同的α和β亚单位组成24种二聚体,参与细胞与细胞外基质的信号转导以及细胞与细胞之间的相互作用,在细胞正常发育和一些病理过程,如肝脏纤维化中发挥重要作用。但是FN/整合素β信号通路在肝脏脂代谢中的作用及其机制尚不清楚。【目的】研究FN/整合素β对短期高脂饮食(High Fat Diet,HFD)诱导的脂肪肝的作用及其机制。【方法】1.用短期HFD诱导小鼠早期脂肪肝模型,再给予整合素β的拮抗剂ATN161处理。用肝脏冰冻切片油红O染色和肝脏脂质抽提检测脂肪肝表型,同时检测血浆脂质水平,腹腔葡萄糖耐量试验(Intraperitoneal Glucose Tolerance Test,IPGTT);用实时荧光定量核酸扩增系统(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction Detecting System,q PCR)检测脂代谢相关基因的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脂代谢相关蛋白的表达。2.用纤维连接蛋白(FN)处理Hep G2细胞的同时给予ATN161处理,检测脂代谢相关基因的表达量变化。【结果】1.短期HFD喂养显著增加小鼠肝脏脂质沉积,改变了脂代谢相关基因及纤维连接蛋白(FN)、α平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)的表达。与对照组相比,HFD组小鼠肝脏甘油三酯(TG)含量显著增加(P<0.05);血浆胆固醇(CHO)(P<0.001)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.05)增加;肝脏FN和α-SMA表达量显著增加。2.ATN161显著下调短期HFD喂养小鼠肝脏α-SMA的表达,增加肝脏脂质沉积和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ,PPARγ)及其靶基因的表达。与HFD组相比,HFD+ATN161组肝脏TG含量进一步增加(P<0.05)。肝脏脂质合成(FAS,SCD1)和摄取(CD36,FATP1)关键基因表达量增加,它们是PPARγ的靶基因且PPARγ的表达量也增加。而且PPARγ和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)蛋白表达也明显增加。3.FN显著抑制Hep G2细胞脂质合成关键基因的表达,ATN161处理明显减弱其抑制作用。予FN处理的Hep G2细胞,脂合成关键基因碳水化合物反应元件结合蛋白(CHREBP),固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1),乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和SCD1的表达量较对照组显著下降,而FN+ATN161处理组CHREBP,ACC和SCD1的表达量较FN组显著上调,基本恢复至对照组水平。【结论】1.短期HFD喂养(5天)模拟的脂肪肝发病阶段的小鼠不仅有肝脏脂质沉积增加和胰岛素抵抗,而且肝脏纤维化信号通路已经激活。2.抑制FN/整合素β信号通路可以阻断短期HFD喂养激活的肝脏纤维化信号通路,同时通过增加PPARγ表达进一步增加短期HFD喂养诱导的肝脏脂质沉积。