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球毛壳菌(Chaetomium globosum)属于子囊菌门,是一种植物病害的广谱生物防治微生物.为了了解球毛壳菌的遗传背景和生产上的应用打下基础,构建了球毛壳菌菌丝体的cDNA文库.cDNA文库的构建是研究特定组织基因表达情况和筛选目的基因的有利工具.按异硫氰酸胍法提取总RNA,以质粒pBluescipt Ⅱ sk(+)为载体,以E. coli DH5 α为受体菌,通过加EcoRI接头定向克隆的方法构建了球毛壳菌的cDNA文库,既简便、快速、省钱,又能达到构建cDNA文库的目的.对于ESTs序列测定来说,所需cDNA文库的构建方法主要有两种.一是采用随机引物合成双链cDNA,二是采用oligo-dT为引物.本研究采用后一种方法,即带有XhoⅠ酶切位点的oligo-dT衔接物.该文库的滴度为2.25×10<4>pfu/ml,重组率为96.4％.以T3为测序引物,从假定的cDNA的5端开始测序.测序产生了3507个可读序列,去掉小于100bp的短序列.用PHRAP软件对所获得的3116个表达序列标签(EST)进行拼接,生成387个contigs和1023个singlets.BLAST分析表明,513个单一基因序列是已知基因(代表着466个mRNA的基因),897个单一基因序列代表着新基因.通过E-mail从国际DNA数据库(DDBJ)取得了1410条序列的登录号.从已知基因中鉴定了几丁质酶Ⅲ基因、β-1,3-葡聚糖酶基因、海藻糖特异性外源凝集素基因、麦角固醇生物合成基因和循环肽HC毒素基因等生物防治相关基因.根据EST分析的结果,从cDNA文库中挑取几丁质酶Ⅲ基因、β-1,3-外切葡聚糖酶基因、岩藻糖特异性外源凝集素基因和循环肽HC-毒素基因的克隆进行了测序和序列分析.0_000616等9个EST序列进行在线BLAST分析时,在NCBI数据库中-Ⅰ-没有发现显著性匹配序列,而与几丁质酶Ⅲ实际序列的比对分析中却显示出很高的相似性.对某个EST序列进行BLAST分析时没有显著性匹配,说明这条EST序列可能代表着新基因,并不一定是新基因.为了进一步验证PHRAP软件是否适合在表达序列标签分析中应用,通过在线BLAST分析对BP113207蛋白基因、延长因子1-α基因、ADP/ATP转运蛋白基因、遍在蛋白缀合酶基因和β-葡糖苷酶5基因的拼接序列和拼接成这些序列的EST序列进行了生物信息学分析.