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目的：探讨cAMP-PKA信号通路在VIP-AQP3调节肠道动力和水液代谢中的作用,以及硝菔通结方对VIP-cAMP-PKA-AQP3通路的干预效应,为硝菔通结方治疗功能性便秘提供科学依据,为中医药治疗功能性便秘开辟新的研究思路。方法：①VIP对功能性便秘大鼠排便及AQP3、cAMP-PKA的影响：SD大鼠60只随机分为4组：空白组、模型组(复方地芬诺酯灌胃)、VIP组(VIP尾静脉注射)、模型+VIP组(复方地芬诺酯灌胃+VIP尾静脉注射),每组15只,给药2周后进行指标检测。②cAMP-PKA在VIP-AQP3信号通路中的调控作用：分离并培养SD大鼠结肠上皮细胞,将细胞分为4组：空白对照组(培养基)、VIP组(VIP激动剂)、cAMP-PKA信号通路抑制剂组(VIP+cAMP-PKA信号通路抑制剂)、cAMP-PKA信号通路激动剂组(VIP+cAMP-PKA信号通路激动剂),每组设6个复孔,分别于孵育3h、6h、12h后进行指标检测。③硝菔通结方对功能性便秘模型大鼠肠动力及VIP-cAMP-PKA-AQP3通路的干预效应：SD大鼠150只,随机分为5组：空白组对照组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组,每组各30只,模型组及各治疗组给予复方地芬诺酯15mg/kg/天灌胃4周后,再给予中药治疗,分别于中药治疗后1、2、3周每组各取10只大鼠进行指标检测。指标检测：检测大鼠首粒黑便的排出时间及粪便含水率；PowerLab检测在体结肠肌电；Q-PCR和Western bolt分别检测结肠组织及细胞中AQP3、 cAMP、PKA mRNA及蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间延长,粪便含水率减少；VIP组大鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便含水率增加。与模型组比较,模型+VIP组及硝菔通结方各剂量组大鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便含水率不同程度增加。结肠肌电检测结果：与空白组比较,模型组慢波频率减慢,振幅增大,波形不规律；VIP组频率增加,振幅变化不明显；与模型组比较,模型+VIP组及硝菔通结方高、中剂量组大鼠频率增加,振幅有所减小。Q-PCR和Western bolt检测结果显示：与空白组比较,模型组大鼠结肠组织中AQP3、 cAMP和PKA mRNA及VIP和AQP3蛋白表达水平均降低,VIP组升高；与模型组比较,模型+VIP组上述指标的表达水平升高。大鼠结肠上皮细胞检测结果,与空白组比较,VIP组各时间点AQP3、cAMP、PKA mRNA和蛋白的表达有升高趋势；与VIP组比较,CAMP-PKA信号通路抑制剂组3h、6h、12h各时间点AQP3、cAMP、PKA mRNA表达水平降低,CAMP-PKA信号通路激动剂组上述指标的表达有升高趋势,且6h变化较为明显；硝菔通结方各剂量组大鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3mRNA和蛋白的表达水平有所升高,且高剂量组和治疗3周后的变化最为明显。结论：①VIP可以提高胃肠动力和调节肠道水液代谢,同时调节结肠组织中AQP3、cAMP和PKA的表达水平。②VIP可能是通过cAMP-PKA信号通路调控AQP3的表达。③硝菔通结方可以调节肠动力和肠道水液代谢治疗功能性便秘,且具有一定的时间和剂量依赖性,其调节肠动力和肠道水液代谢可能是通过干预VIP-cAMP-PKA-AQP3通路来实现的。