目的:人参林蛙油软胶囊是以人参和林蛙油为主要原料研制的一种增强机体免疫功能的保健食品。本文以人参林蛙油软胶囊为研究对象,在对其进行初步安全性评价的基础上,探讨其对机体细胞、体液免疫功能的影响,为人参林蛙油软胶囊的开发提供实验基础。方法:1.毒理学安全性评价小鼠经口急性毒性试验:采用最大耐受剂量法,选SPF级ICR小鼠20只,雌雄各半,经口一次给予受试物18.6g/kg BW,观察期限为14天,观察小鼠的中毒及死亡情况。遗传毒性试验:小鼠骨髓细胞微核试验:采用30h经口给予受试物方法,每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE),计算微核率。小鼠精子畸形试验:选择成年雄性小鼠,采用经口灌胃方式给予受试物,每日1次,连续灌胃5天,末次灌胃后第30d,取出双侧附睾,制备精子悬液涂片,计算小鼠精子畸形发生率。Ames试验:采用平板掺入法。选用四株组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,分别为TA97、TA98、TA100、TA102。加与不加S9代谢活性系统下各做一次实验。分别设5个剂量组,每个剂量组做三个平行样,培养48h后计数每皿菌落数。大鼠28天喂养试验:选用SPF级Wistar大鼠,雌雄各40只,体重:65g~85g,实验期限为28天,实验期间观察动物的一般状态、中毒症状及死亡情况,每周记录一次体重,摄入量,计算食物利用率。实验第29天,解剖大鼠,进行血液学、血液生化学及病理组织学检查。2.增强免疫功能研究小鼠的胸腺和脾脏指数:经口给予小鼠受试物30天后,剖检取胸腺和脾脏,计算脏体比。Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力:经口给予小鼠受试物30天后,制备脾细胞悬液,培养脾淋巴细胞,加入MTT培养4h后,在570nm测定OD值。迟发型变态反应(DTH):经口给予小鼠受试物30天后,腹腔注射0.2ml SRBC免疫,免疫后4天,测量左后足跖部厚度。小鼠抗体生成细胞数:经口给予小鼠受试物30天后,腹腔注射0.2ml SRBC免疫,免疫后4天,取脾,制备脾细胞悬液,与一定量的SRBC混合后加入琼脂糖凝胶中,测定溶血空斑数。半数溶血值(HC50):经口给予小鼠受试物30天后,腹腔注射2%(V/V)SRBC免疫,免疫后4天分离血清,稀释后加入SRBC、补体及都氏试剂。在540nm测定OD值。结果:1.毒理学安全性评价急性经口毒性试验中,人参林蛙油软胶囊的小鼠经口MTD大于18.6g/kg BW,其急性毒性分级为实际无毒级。遗传毒性试验结果显示,小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验结果均为阴性。大鼠28d喂养实验结果显示,实验期间,观察大鼠生长发育情况良好,各剂量组大鼠体重、总食物利用率、血液学指标、血液生化学指标、脏/体比值与对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。病理学检查结果显示,高剂量组与对照组大鼠肝脏、肾脏、脾脏、睾丸等脏器均未见病理学改变。大鼠经口NOAEL大于5.33g/kg BW(高剂量组的剂量),相当于成人日摄入量的100倍。2.增强免疫功能研究在细胞免疫和体液免疫试验中,人参林蛙油软胶囊高剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),可增强迟发型变态反应(DTH)的程度,促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖,增加小鼠抗体生成细胞数、增加血清溶血素含量(HC50)。各剂量组小鼠的胸腺/体重、脾脏/体重与阴性对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:1.人参林蛙油软胶囊的小鼠经口MTD大于18.6g/kg,急性毒性分级为实际无毒级。三项遗传毒性试验(小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验)结果均为阴性。大鼠28天喂养试验中,未发现有明显毒性作用,NOAEL大于5.33g/kg,相当于人日摄入量的100倍。2.人参林蛙油软胶囊在一定剂量下能增强机体的细胞免疫功能和体液免疫功能。